芽胞@Zr4+微球用于牛IFn-γ荧光免疫分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiabhh
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牛结核病是一种具有感染性及传播性的慢性牛类疾病,主要由牛分枝杆菌引起,其对牛类健康及人类健康都存在严重威胁。由致敏的T淋巴细胞释放的牛IFN-γ可用于特异性的牛结核病早期诊断。本研究基于辣根过氧化酶可以催化H2O2氧化Amplex Red产生具有强荧光性质的试卤灵,建立了一种基于芽胞@Zr4+的新型牛IFN-γ荧光免疫传感技术,并将其成功用于牛IFN-γ的免疫测定和牛结核病的早期诊断中。实验结果表明:  1.经过处理后的巨大芽胞杆菌芽胞稳定性、分散性良好,Zr4+离子能通过处理后芽胞表面的氨基、羧基和羟基吸附于其表面,其吸附行为符合Langmuir吸附模型。  2.在0.10 ng/mL-20.00 ng/mL范围内牛IFN-γ的浓度与荧光信号强度值呈良好的线性关系(R2=0.998),检测限为40.00 pg/mL(S/N=3)。该方法具有良好的重复性和特异性。该方法用于牛血清、血浆样品中牛IFN-γ的定量分析具有良好的精准线,在新生牛血清中加标回收率分布在97.6%-110.0%之间,检测牛PPD刺激后的感染牛血浆中IFN-γ并与商业ELISA试剂盒方法做比较,相对误差分布在-3.3%-4.2%之间。运用本方法分别对54份牛PPD、禽PPD刺激后的血浆做检测,并与商业BovigamTM试剂盒的诊断结果做比较,该方法敏感度为82.6%,特异性为90.3%,符合率为87.0%。
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