重症急性胰腺炎早期大鼠血清IL-6水平与肠上皮细胞Claudins蛋白表达关系的初步研究

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目的观察大鼠重症急性胰腺炎血清IL-6水平与肠上皮Claudins蛋白表达变化,初步探讨Claudins蛋白与IL-6在重症急性胰腺炎肠粘膜屏障损伤中的关系。方法SD大鼠58只,体重320-350g,随机分成对照组(n=10),实验组(n=48)。实验组分为3、12、24、48h四个时间点,每个时间点12只。所有大鼠在实验前禁食12h,自由饮水。实验组分两次间隔1h腹腔内注射20%L-精氨酸溶液(2.5g/kg×2),对照组大鼠同法予等量无菌生理盐水。对照组大鼠在末次注射后于颈内静脉取血2ml后立即处死,实验组大鼠在末次注射后3、12、24、48h四个时间点随机各取12只于颈内静脉取血2ml后处死,取出胰腺组织、回肠组织,胰腺组织HE染色后观察组织形态,回肠组织电镜下观察肠上皮超微结构变化,采用酶联免疫吸附法(ELSIA)检测血清IL-6水平,采用鲎试剂法(LAL)检测血清内毒素水平,应用PCR检测各组织细菌DNA片段,应用免疫组化测定肠上皮Claudins蛋白表达;结果对照组胰腺组织未见出血、坏死,实验组3h与对照组无明显变化,实验组其他时间点可见胰腺组织不同程度的胰腺组织破坏并出血、坏死,48h时改变最显著;对照组电镜下肠上皮超微结构未见异常,实验组3h时无明显改变,实验组其他时间点可见肠上皮断裂并脱落,细胞间隙增宽,48h时改变最明显。ELSIA法示对照组与实验组血清IL-6水平分别为0.312±0.030、0.326±0.037、0.337±0.016、0.359±0.022、0.378±0.036,3、1.2、24、48h与对照组比较有统计学差异(P<0.05);LAL法示对照组与实验组血清内毒素水平分别为0.028±0.004、0.155±0.014、0.274±0.020、0.352±0.017、0.490±0.523,各实验组与对照组比较有统计学差异(P<0.05);实验组各时间点各组织中细菌易位率示实验组3h与对照组比较无明显统计学差异(P=0.074,P>0.05),实验组12h、24h、48h与对照组比较具有统计学差异(P<0.05);免疫组化法示对照组Claudins蛋白均匀的分布在肠上皮细胞连接的顶端;实验组分布不均匀,Claudins蛋白表达随时间点推移表达逐渐降低,于48h时表达最低。对照组与实验组平均光密度值分别为0.3578±0.0021、0.3531±0.0020、0.3513±0.0018、0.3492±0.0016、0.3185±0.0023,3h时与对照组比较无统计学差异(P>0.05),12、24、48h与对照组之间有统计学差异(P<0.05);实验组大鼠血清高浓度IL-6与肠上皮Claudins蛋白低表达比较具有相关性(r=0.735,P<0.05)。结论血清IL-6水平在重症急性胰腺炎大鼠早期即可升高,可能导致肠上皮Claudins蛋白表达降低。
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