地蟞虫酶解液中抗氧化肽的分离

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地鳖虫(EupolyphagasinensisWalker)属于鳖蠊科昆虫。它是一种重要的药材,具破淤血、续筋骨功能,用来治疗跌打损伤,淤血肿痛等疾病。但是,地鳖虫作为一种高蛋白昆虫食品,有关其水解研究及其抗氧化肽分离的研究尚未见报道。本文以地鳖虫为原料,对其常规成分及营养成分进行了分析,并对地鳖虫酶解的工艺条件进行了优化;评价了酶解物的抗氧化活性;利用离子交换层析技术、凝胶过滤层析技术、高效液相分离技术从酶解物中分离了抗氧化肽组分,主要内容及结果归纳如下:   1、地鳖虫鲜样中蛋白质含量为23.6%,其氨基酸组成合理,必需氨基酸含量占氨基酸总量的31.9%,不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的72.2%,维生素E含量11.6mg/100g鲜样,矿物质元素中K、P含量最高分别为1996.3mg/100g鲜样和1656.7mg/100g鲜样。   2、利用响应面法优化了Arazyme酶酶解地鳖虫的条件,其最佳工艺参数为:每克地鳖虫的加酶量为532U;酶解时间为24h;水料比30∶1,在此条件下得地鳖虫酶解液中肽键含量为31.05mmol/g.pro。   3、以亚油酸氧化产生的丙二醛(MDA)为指标,评价了氧气含量和肽含量对亚油酸自动氧化的影响。自动氧化时间7天时,以氧气量与反应器皿体积比为0.80∶1的氧气含量反应时的亚油酸氧化较充分,其氧化产物MDA量的OD值范围在0.8-0.9之间。在亚油酸氧化反应体系中加入1.3mg及2.0mg肽量时,其对亚油酸自动氧化抑制率分别为80.8%、88.2%。   4、利用离子交换层析技术、凝胶过滤层析技术、高效液相分离技术从地鳖虫酶解物中分离了抗氧化肽组分。NaCl浓度为0.25mmol/L,其梯度斜率为0.00125moL/L·min时,地鳖虫酶解物的分离效果较好。在此条件下得到的三个肽组分为I-F1、I-F2、I-F3,其亚油酸氧化抑制率分别为76.15%、79.7%、88.8%。对I-F3肽组分进行凝胶过滤层析分离时得到了IG-F1、IG-F2、IG-F3三个肽组分,其亚油酸氧化抑制率分别为72.5%、75.7%、82.5%。对I-F3、IG-F3肽组分进行高效液相色谱分析结果表明,在保留时间9min处都可以得到单一的峰。为了探索工业上生产抗氧化肽的途径,本实验直接利用制备型高效液相色谱对地鳖虫酶解液进行分离,得到了五个肽组分,其亚油酸氧化抑制率分别为12.43%、28.56%、34.75%、66.97%、80%。
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