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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的的恶性肿瘤之一,探讨肝癌发生发展的分子机制、寻找肝癌早期诊断的生物学标志,这对肝癌早期诊断和治疗具有重要的临床意义。黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是一种强烈的肝癌诱发剂,它是目前应用最广泛的肝癌动物模型诱癌剂之一,被广泛应用于肝癌病因、发病机理、化学预防等方面的研究。本研究用黄曲霉毒素B1感染小鼠,然后利用荧光定量PCR对黄曲霉毒素B1感染后的小鼠肝脏的cps1、otc和sir5基因的mRNA量进行了相对定量。结果发现cps1、otc和sir5基因的mRNA量都发生下调,其中cps1下调这结果与本实验课题组的双向电泳的结果一致。在黄曲霉毒素B1感染小鼠中,动态测定小鼠血氨浓度的变化,发现血氨浓度随着毒素感染时间的推移在上升。PCR法检测到cps1、otc和sir5基因在小鼠脑、心脏、脾脏、肝脏、肾、小肠、睾丸等组织器官都有表达。接着,将cps1、otc和sir5基因构建到原核表达载体转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌,通过IPTG诱导阳性菌,成功表达了OTC和SIR5两个蛋白,并纯化这两个蛋白,制备抗原,免疫Bal/c小鼠,ELISA测定血清效价,最后成功制备了OTC和SIR5的多克隆抗体。通过Far western法初步鉴定到OTC与SIR5蛋白互作。最后研究CPS1的细胞生物学功能。首先,构建了cps1的干扰载体,转染肝癌细胞系BEL-7402和肝正常细胞chang liver。在cps1干扰的细胞系中,检测到OTC和SIR5蛋白都发生了下调。MTT法检测黄曲霉毒素B1对不同细胞的半抑制剂量IC50,在此基础上检测到干扰cps1后细胞对黄曲霉毒素B1耐受能力降低。通过荧光定量PCR法检测到被黄曲霉毒素B1感染的正常肝细胞chang liver的cps1基因的mRNA量持续降低。CPS1和OTC都是尿素循环的关键酶,本实验结果提示,黄曲霉毒素B1会干扰尿素循环的正常进行,影响CPS1和OTC的转录水平。同时CPS1可能参与人类肝癌的发生发展过程,提示CPS1可能是肝癌的分子标记物,在肝癌的诊断和预后评估等方面具有潜在的临床应用价值。