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研究背景新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是缺氧缺血影响脑细胞能量代谢,引起神经元凋亡、坏死,继而使大脑产生不可逆损伤,造成新生儿残疾和死亡,故采取措施切断病理过程,减少后遗症迫在眉睫。新生儿HIBD尚缺乏特异的疗法,亚低温治疗可行但受时间窗限制,高压氧治疗能提高脑供氧,减轻脑损伤,但较少医院能采用系统规范的治疗。干细胞移植被证明在动物中是有效的,可改善运动发育及认知功能；促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)等相关因子的研究也在进行中。G-CSF是刺激髓粒系造血细胞增殖分化的生长因子,结合受体后激活多种信号转导通路继而激活下游底物,影响细胞增殖、分化,发挥诱导神经发生、血管生成等保护作用。研究目的探讨G-CSF对HIBD新生大鼠内源性神经血管再生的影响及其可能的机制。研究方法将新生7日龄SD大鼠126只随机分为假手术组、对照组及G-CSF组。对照组和G-CSF组采用改良的Rice法制备HIBD模型,假手术组仅游离右颈总动脉,不结扎,不缺氧。G-CSF组造模术后连续7天腹腔注射G-CSF,50ug/kg,每天一次。术后记录各组大鼠睁眼时间,每3天称量其体重监测动态变化;造模后21、28日龄各组大鼠进行神经行为评分;术后14、21、28日龄各组大鼠用HE染色观察室管膜下区及海马齿状回病理形态变化,用免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子的表达,用5-溴-2-脱氧脲苷(BrdU)/双皮质素(DCX)免疫荧光双标检测神经细胞增殖情况;采用Western blot法检测14日龄各组大鼠右侧大脑GSK3β及p-GSK3β的表达。结果1.生长发育、神经行为评分:G-CSF组大鼠睁眼时间短于对照组;各组大鼠体重随天数增加而增加,28日龄时,G-CSF组体重较对照组明显升高;21、28日龄G-CSF组大鼠Garcia评分较对照组有所改善,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.HE染色结果:与对照组相比,14、21、28日龄的大鼠G-CSF组在室管膜下区及海马齿状回病理形态均有所改善,神经元排列较紧密、有序,新生神经元增多。3.VEGF免疫组化:与对照组比较,G-CSF组14、21、28日龄时在海马齿状回区VEGF的表达强度均显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；在室管膜下区,G-CSF组28日龄的大鼠VEGF的表达强度较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.BrdU/DCX免疫荧光双标:各组大鼠在室管膜下区及海马齿状回BrdU及BrdU/DCX荧光双标阳性细胞随天数增加呈下降趋势。与对照组相比,G-CSF组14、21天大鼠在海马齿状回的BrdU及BrdU/DCX阳性细胞增多,在室管膜下区,G-CSF组在14、21、28天BrdU及BrdU/DCXβ阳性细胞增多,差异均有统计学意义(P＜0.05)。5.GSK3β及p-GSK3β表达:各组间GSK3β表达未见明显差异;而与对照组相比,G-CSF组p-GSK3β(Ser9)与GSK3β表达量的比值较低,且差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论G-CSF可促进神经血管再生,改善HIBD大鼠生长发育、神经行为评分,并下调p-GSK3β继而提高GSK3β的活性。