论文部分内容阅读
本文主要从以下几方面进行论述：
第一部分:礞石滚痰汤对癫痫小鼠脑电图及NMDAR1与GABA-AR表达的影响
目的:
建立戊四氮(pentylenetetrazole，PTZ)慢性点燃模型，观察礞石滚痰汤对小鼠行为学、脑电图、海马NMDARl与GABA-AR表达的影响。
方法:
将PTZ点燃成功的癫痫模型小鼠随机分为四组:模型组:B组;礞石滚痰汤低剂量组:C组;礞石滚痰汤高剂量组:D组;丙戊酸钠组:E组。每组各10只，另设空白对照组:A组10只。B组给予生理盐水灌胃，C、D、E组分别给予礞石滚痰汤低、高剂量及丙戊酸钠等不同药物灌胃处理。给药4周后，除空白对照组外，各组小鼠再次腹腔注射PTZ45mg/(kg·d)，观察动物行为的改变，利用脑立体定位仪记录各组癫痫小鼠右侧额叶皮质的脑电变化。取小鼠海马组织，通过氨基酸试剂盒和酶联免疫吸附法(ELISA)法测定谷氨酸(glutamate，Glu)和γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid，GABA)的含量，蛋白免疫印迹(wiestemblot)法检测NMDAR1及GABA-AR的表达水平。
结果:
1.行为学表现
与B组比较，D、E组小鼠癫痫发作的潜伏期明显延长(P＜0.05)，1h强直-阵挛发作的次数减少(P＜0.05)，发作持续时间缩短(P＜0.05)。D组与E组相比较，无明显差异(P＞0.05)，A组均无癫痫发作。
2.EEG表现
A组脑电图均表现为以α波和β波为主的基础脑电波，波幅平稳，无明显节律性。B组可以观察到明显的阵发性痫性放电，波幅振幅大，主要表现为尖锐波峰和短暂突发的尖波、棘波、棘慢复合波等。与B组相比，C、D组平均波幅明显减少(P＜0.05)，且D组于15min后才出现第一个明显波幅。E组经治疗后偶有癫痫波出现，波幅均在1mV之内。
3.氨基酸检测与western blot结果
Glu含量变化:与A组比较，B组海马Glu升高显著(P＜0.05)，与B组比较，C、D、E组降低明显(P＜0.05)，D组含量降低与E组无明显统计学差异(P＞0.05)。GABA含量变化:GABA含量以D组升高最显著，与B、C、E组比较有显著性差异(P＜0.05)，D组含量升高与E组比较，有统计学差异(P＜0.01)。
通过western blot检测NMDAR1及GABA-AR表达，发现B组NMDAR1较A组明显增高，GABA-AR较A组明显降低(P＜0.01)，C、D、E组NMDAR1较B组明显降低(P＜0.05)，C、D、E组GABA-AR较B组明显增高(P＜0.05)，D组与E组间无明显差异(P＞0.05)。
结论:
1.礞石滚痰汤可以延长小鼠癫痫发作潜伏期，缓解1h强直-阵挛发作次数，缩短发作持续时间，减轻发作等级，抑制癫痫样放电波幅、减少放电频率;
2.礞石滚痰汤可以降低海马区Glu含量，抑制NMDARl的表达，升高GABA含量，促进GABA-AR的表达，纠正兴奋性和抑制性氨基酸递质的失衡。
第二部分:礞石滚痰汤对癫痫小鼠海马内GFAP表达的影响
目的:
建立PTZ慢性点燃模型，观察礞石滚痰汤对小鼠海马内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。
方法:
造模及分组同第一部分。取小鼠海马组织后，多聚甲醛过夜，固定后取出，于冰冻切片机上制作冰冻切片，进行GFAP免疫组化染色，观察海马CA1、CA3区GFAP形态与数量，再用实时荧光定量(Q-PCR)法检测GFAP mRNA的表达水平。
结果:
与A组相比，B组GFAP免疫阳性反应明显增强，海马区数目明显增多，GFAP mRNA表达增强，有统计学意义(P＜0.05)。与B组相比，C、D、E组GFAP免疫阳性反应较弱，数量少于模型组，GFAPmRNA表达显著下调(P＜0.05)，且中药低剂量组效果优于高剂量组，但与阳性对照组比较无明显差异(P＞0.05)。
结论
礞石滚痰汤可以减少与抑制PTZ点燃小鼠海马内GFAP的数量与过度表达，这可能是礞石滚痰汤发挥抗癫痫作用的机制之一。
第一部分:礞石滚痰汤对癫痫小鼠脑电图及NMDAR1与GABA-AR表达的影响
目的:
建立戊四氮(pentylenetetrazole，PTZ)慢性点燃模型，观察礞石滚痰汤对小鼠行为学、脑电图、海马NMDARl与GABA-AR表达的影响。
方法:
将PTZ点燃成功的癫痫模型小鼠随机分为四组:模型组:B组;礞石滚痰汤低剂量组:C组;礞石滚痰汤高剂量组:D组;丙戊酸钠组:E组。每组各10只，另设空白对照组:A组10只。B组给予生理盐水灌胃，C、D、E组分别给予礞石滚痰汤低、高剂量及丙戊酸钠等不同药物灌胃处理。给药4周后，除空白对照组外，各组小鼠再次腹腔注射PTZ45mg/(kg·d)，观察动物行为的改变，利用脑立体定位仪记录各组癫痫小鼠右侧额叶皮质的脑电变化。取小鼠海马组织，通过氨基酸试剂盒和酶联免疫吸附法(ELISA)法测定谷氨酸(glutamate，Glu)和γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid，GABA)的含量，蛋白免疫印迹(wiestemblot)法检测NMDAR1及GABA-AR的表达水平。
结果:
1.行为学表现
与B组比较，D、E组小鼠癫痫发作的潜伏期明显延长(P＜0.05)，1h强直-阵挛发作的次数减少(P＜0.05)，发作持续时间缩短(P＜0.05)。D组与E组相比较，无明显差异(P＞0.05)，A组均无癫痫发作。
2.EEG表现
A组脑电图均表现为以α波和β波为主的基础脑电波，波幅平稳，无明显节律性。B组可以观察到明显的阵发性痫性放电，波幅振幅大，主要表现为尖锐波峰和短暂突发的尖波、棘波、棘慢复合波等。与B组相比，C、D组平均波幅明显减少(P＜0.05)，且D组于15min后才出现第一个明显波幅。E组经治疗后偶有癫痫波出现，波幅均在1mV之内。
3.氨基酸检测与western blot结果
Glu含量变化:与A组比较，B组海马Glu升高显著(P＜0.05)，与B组比较，C、D、E组降低明显(P＜0.05)，D组含量降低与E组无明显统计学差异(P＞0.05)。GABA含量变化:GABA含量以D组升高最显著，与B、C、E组比较有显著性差异(P＜0.05)，D组含量升高与E组比较，有统计学差异(P＜0.01)。
通过western blot检测NMDAR1及GABA-AR表达，发现B组NMDAR1较A组明显增高，GABA-AR较A组明显降低(P＜0.01)，C、D、E组NMDAR1较B组明显降低(P＜0.05)，C、D、E组GABA-AR较B组明显增高(P＜0.05)，D组与E组间无明显差异(P＞0.05)。
结论:
1.礞石滚痰汤可以延长小鼠癫痫发作潜伏期，缓解1h强直-阵挛发作次数，缩短发作持续时间，减轻发作等级，抑制癫痫样放电波幅、减少放电频率;
2.礞石滚痰汤可以降低海马区Glu含量，抑制NMDARl的表达，升高GABA含量，促进GABA-AR的表达，纠正兴奋性和抑制性氨基酸递质的失衡。
第二部分:礞石滚痰汤对癫痫小鼠海马内GFAP表达的影响
目的:
建立PTZ慢性点燃模型，观察礞石滚痰汤对小鼠海马内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。
方法:
造模及分组同第一部分。取小鼠海马组织后，多聚甲醛过夜，固定后取出，于冰冻切片机上制作冰冻切片，进行GFAP免疫组化染色，观察海马CA1、CA3区GFAP形态与数量，再用实时荧光定量(Q-PCR)法检测GFAP mRNA的表达水平。
结果:
与A组相比，B组GFAP免疫阳性反应明显增强，海马区数目明显增多，GFAP mRNA表达增强，有统计学意义(P＜0.05)。与B组相比，C、D、E组GFAP免疫阳性反应较弱，数量少于模型组，GFAPmRNA表达显著下调(P＜0.05)，且中药低剂量组效果优于高剂量组，但与阳性对照组比较无明显差异(P＞0.05)。
结论
礞石滚痰汤可以减少与抑制PTZ点燃小鼠海马内GFAP的数量与过度表达，这可能是礞石滚痰汤发挥抗癫痫作用的机制之一。