拟南芥CHR16响应干旱胁迫的机制研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rockyliangchao
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染色质重塑对真核生物DNA复制、转录和基因组稳定性的调控至关重要。在植物对干旱、盐碱等非生物胁迫中,依赖ATP的染色质重塑复合体发挥了重要作用。SNF2类染色质重塑复合体ATP酶在植物响应逆境胁迫中扮演重要角色。CHR16是SNF2家族的重要成员。本研究以拟南芥为材料,通过表型分析、qRT-PCR、生理生化、酵母双杂交、BiFC、转录组等方法,探索了CHR16在拟南芥干旱胁迫响应中的功能。主要结果如下:1.通过干旱胁迫实验分析,我们发现,与WT相比较,chr16突变体在干旱胁迫条件下具有更高的存活率,且chr16突变体中CPK11、Di19及其下游的干旱胁迫响应相关基因PR1、PR2、PR3、PR5的表达水平上调。这表明,CHR16可能负向调控植物的干旱耐受性。2.与WT相比较,干旱胁迫处理后,chr16突变体中APX、CAT、POD的活性水平显著提高。这表明,chr16具有更强的清除胁迫条件下产生ROS的能力,从而降低了干旱胁迫对植物造成的损伤。3.通过甘露醇和PEG6000处理WT和chr16来模拟干旱胁迫效应的实验,发现在不同浓度的渗透胁迫下,chr16突变体根长被甘露醇和PEG6000抑制的情况弱于WT,这表明chr16突变体对渗透胁迫有更强的耐受性。且甘露醇处理后,与WT相比较,chr16突变体中ABA响应基因ABI3的表达水平显著升高。此外,WT中NCED3的表达水平低于chr16突变体,CYP707A3的表达水平高于chr16突变体。这表明,CHR16会影响ABA通路响应基因、ABA合成以及分解代谢相关基因的表达水平。因此,我们推测chr16突变体可能会通过ABA信号通路,来提高突变体植株的渗透胁迫的耐受性。4.通过对叶片气孔的分析发现,chr16突变体的气孔密度和气孔指数明显低于WT,并且与WT相比较,突变体中气孔发育相关调控基因YDA、MPK3、MPK6、TMM的表达水平上升,尤其在干旱胁迫处理后表达水平显著升高。因此,我们推测,CHR16可能通过负向调控YDA、MPK3、MPK6、TMM的表达水平,进而影响气孔的发育。5.酵母双杂交实验发现CHR16与RD2、DI19存在相互作用,RD2与Di19参与干旱胁迫响应,BiFC的实验进一步验证了它们存在互作,这表明CHR16可能会通过RD2、Di19参与干旱胁迫响应。6.RNA-seq全面分析了chr16突变体在干旱胁迫下转录图谱发生的变化。发现在干旱胁迫条件下有1816个基因的表达与CHR16存在关联,其中,包括了ABA信号通路的成员。我们挑选了SnRKs家族中的成员做了进一步的分析,通过qRT-PCR结果发现,与WT相比较,SnRK2.3和SnRK2.4在chr16突变体中的表达水平显著升高,与RNA-seq数据分析结果一致。并且,我们通过酵母双杂交和BiFC实验,证实了CHR16与SnRK2.3、SnRK2.4存在相互作用。因此,我们推测CHR16可能是通过SnRK2s参与了ABA介导的干旱胁迫响应。7.通过酵母杂交,我们筛选到了一个PP2Cs家族中的磷酸酶PP2C62,通过BiFC实验发现CHR16与PP2C62存在相互作用。qRT-PCR分析,与WT相比较,干旱胁迫处理后,chr16突变体植株中PP2C62的表达水平显著升高。这说明CHR16可能会通过影响PP2C62的表达水平来参与拟南芥的干旱胁迫响应。我们进一步通过遗传杂交获得了chr16 pp2c62的纯合双突变体。对WT、chr16、pp2c62、chr16 pp2c62分别施加外源ABA,结果发现,pp2c62对ABA敏感性和WT相似,chr16对ABA表现超敏。与chr16相比,chr16 pp2c62双突变体的ABA敏感表型减弱。这些结果说明,chr16突变体对ABA的敏感性,部分依赖于PP2C62。因此,我们推测PP2C62可能通过与CHR16相互作用来调控ABA信号通路中转录因子的表达水平。综上所述,CHR16可能通过调控气孔来影响拟南芥的干旱耐受性。此外CHR16也可能通过与RD2、Di19干旱胁迫响应基因以及与ABA信号通路成员相互作用,参与干旱胁迫响应。这有助于我们对染色质重塑复合体ATP酶参与植物逆境胁迫的认识。
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