巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）是天然橡胶的主要来源,天然橡胶是我国重要的战略资源。橡胶树在1950年被成功引种到中国南部,但由于该物种为典型的热带作物,对低温胁迫极其敏感,寒害成为限制我国天然橡胶种植的主要因素之一。因此,研究橡胶树如何应对低温胁迫尤为重要。Hb ICE2（Inducer of CBF Expression 2）是橡胶树低温应答信号通路中的关键转录因子,但与Hb ICE2蛋白发生互作的蛋白及其功能还不清楚,严重阻碍了橡胶抗寒分子机理的研究。本研究主要对课题组前期筛选到的与Hb ICE2互作的候选蛋白（Hb NAE、Hbb HLH70、Hb1433、Hb FBA和Hb NTF4）的编码基因进行克隆,并对它们的生物学功能进行探究。主要研究结果如下:1、从巴西橡胶树叶片c DNA中克隆得到了Hb NAE、Hbb HLH70、Hb1433、Hb FBA和Hb NTF4五个基因,其开放阅读框大小分别为1350bp,1074bp,783bp,1077bp和1221bp。2、酵母双杂交实验和双分子荧光互补实验显示Hb NTF4和Hbb HLH70与Hb ICE2存在相互作用,Hb NAE、Hb1433、Hb FBA与Hb ICE2不互作,表明Hb NTF4和Hbb HLH70可能通过与低温信号关键因子Hb ICE2相互作用,调控橡胶树低温应答。3、转录活性研究实验显示Hbb HLH70有自激活活性,且自激活活性区域位于N端。4、利用氨基酸序列比对将Hb NTF4和Hbb HLH70与其他植物同族基因进行序列比对;结果表明Hb NTF4、Hbb HLH70与其它植物同族基因高度同源。5、利用烟草瞬时表达以及橡胶树原生质体转化实验对其进行亚细胞定位分析,结果显示Hb NTF4定位于细胞核,细胞膜和细胞质中;Hbb HLH70定位在细胞核中。6、利用RT-PCR分析Hb NTF4和Hbb HLH70在橡胶树叶片、茎、胶乳、根、树皮各组织的表达情况,结果表明:Hb NTF4不存在组织特异性,Hbb HLH70存在组织特异性,在叶片中的表达量明显高于其它组织。7、将转基因纯合植株35S::Hb NTF4和35S::Hbb HLH70进行低温胁迫处理,发现在低温胁迫下,转基因的存活率明显高于野生型植株,通过冷胁迫相关生理指标测定结果表明,转基因植株35S::Hb NTF4和35S::Hbb HLH70丙二醛含量、电导率、H2O2的积累都低于野生型;而脯氨酸的含量高于野生型,这些结果表明35S::Hb NTF4和35S::Hbb HLH70能提高拟南芥的耐寒性。8、对Hb NTF4和Hbb HLH70进行原核表达分析,结果显示:Hb NTF4在37℃、Hbb HLH70在28℃,0.2 mmol/L IPTG浓度下诱导8 h,其表达量最高,纯化得到的Hb NTF4蛋白是否磷酸化Hb ICE2蛋白进而调控其蛋白活性;为Hbb HLH70蛋白是否与Hb ICE2在细胞核中形成蛋白复合体进而参与ICE-CBF冷信号通路调控网络提供实验基础。以上研究结果表明:在低温胁迫下,巴西橡胶树Hb NTF4和Hbb HLH70能够与橡胶树低温信号关键因子Hb ICE2相互作用,通过调控下游胁迫相关基因的表达改变植株的相关指标来提高植物抵御寒冷的能力。