孕激素在子痫前期发病机理TLR4信号通路中的作用研究

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目的:研究孕激素在子痫前期(preeclampsia,PE)孕妇外周血血浆中的水平及其在子痫前期发病机制Toll样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)信号通路中的作用。  方法:选择30例子痫前期孕妇,年龄:28±5岁,孕周34.1±4.1周,用稀释定量法测定其血浆孕激素水平,并与正常孕妇对照;原代培养子痫前期孕妇外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),以不同浓度孕激素(0M、10-8M、10-6M、10-4M)刺激,实时定量聚合酶联反应(Real-timepolymeraseChainreaction,real-timePCR)检测TLR4mRNA、髓样细胞分化蛋白88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)mRNA、核转录因子-kappaB(nuclearfactorkB,NF-kB)mRNA的表达;免疫印迹法Westernblot检测Ikappa-B蛋白的表达,用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactors,TNF-α)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达。  结果:子痫前期孕妇血浆孕激素水平为:376.524nmol/L±145.89nmol/L,正常孕妇血浆孕激素水平为:438.007nmol/L±148.124nmol/L,两组比较差异有显著性,P<0.05。随着孕激素浓度的增加,TLR4mRNA、MyD88mRNA及NF-κBmRNA的相对表达量(2-?CT)逐渐减少,其相对表达量分别为:TLR4mRNA:空白组:1.462±1.102,10-8M组:1.260±0.413,10-6M组:0.852±0.218,10-4M组:0.584±0.029;MyD88mRNA:空白组:1.052±0.269,10-8M组:0.705±0.037,10-6M组:0.2944±0.019,10-4M组:0.097±0.011;NF-κBmRNA:空白组:2.341±0.326,10-8M组:1.045±0.393,10-6M组:0.0212±0.008,10-4M组:0.006±0.0013,各组间的差异均有统计学意义且p<0.05,IkappaB蛋白的表达随着孕激素浓度的增加而升高,其OD比值为:空白组:0.187±0.015,10-8M组:0.777±0.047,10-6M组:1.42±0.092,10-4M组:2.3±0.243,且各组间比较差异有统计学意义:P<0.05;随着孕激素浓度的增加,细胞上清中细胞因子TNF-α(空白组:5.733pg/ml±0.208pg/ml,10-8M组:3.100pg/ml±0.201pg/ml,10-6M组:2.101pg/ml±0.098pg/ml,10-4M组:1.100pg/ml±0.057pg/ml)及IL-6(空白组:215.80pg/ml±34.67pg/ml,10-8M组:97.84pg/ml±2.565pg/ml,10-6M组:67.74pg/ml±0.938pg/ml,10-4M组:30.48pg/ml±0.670pg/ml)表达均减少,且各组间比较均有统计学意义:P<0.05。
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