背景原发性胆汁性肝硬化，是由免疫紊乱介导的慢性进行性非化脓性胆管炎性疾病，可引发肝内中小胆管的损伤和肝内胆汁淤积，病理表现为胆管破坏、门脉区炎症及肝实质碎屑状坏死，最终可进展为肝硬化[1]。近年来，随着环境污染的加重、生活方式的日益西化，以及医生对该病认知程度的提高，PBC在我国的检出率逐年升高。目前认为，PBC是在遗传因素和环境因素的共同作用下，经由免疫反应介导的一种自身免疫性疾病。许多报道显示，PBC发病具有明显的家族聚集现象;双胞胎发病率显著增高; PBC一级亲属发病率比正常人发病率高100倍[2,3]。这些都提示，遗传因素在PBC的发病过程中起着非常重要的作用。国外对PBC的基因易感位点进行了大量的研究[4]。通过文献分析，高加索人和亚洲人的PBC相关SNP位点存在着明显差异。这些基因的不用位点或不同位点的单倍型均不同程度的显示与PBC易感性有关。大量文献显示，东西方人群对比显示不同种族或民族的基因多态性存在很大差异，提示欧美结果不能反映中国人的情况，又因为目前国内这方面的研究较少，所以本研究通过研究候选基因多态性进行中国人PBC相关基因易感多态性研究。目的筛选中国人群中PBC基因易感位点，从影响人群胆汁分泌与排泄功能、小胆管损伤、免疫紊乱等方面，探讨基因多态性对PBC遗传易感性的影响。方法通过大量文献回顾查阅已经报道的东西方人群中与自身免疫性疾病相关的SNP位点及基因，并根据当前研究的与免疫性疾病相关SNPs，分析已发现的一些可能与PBC发病相关SNPs位点，最终确定本课题将要筛选的基因。收集PBC患者及对照全血，用SNP芯片检测易感基因位点，通过质谱分析得出基因分型结果并结合疾病相关临床指标等对其进行多层统计学分析。结果（1）根据目前已经报道的与原发性胆汁性肝硬化以及与自身免疫性疾病和肝脏疾病相关的基因SNPs。针对参与免疫调节、胆汁排泄、胆管上皮损伤机制的19个基因中的49个SNPs设计引物并合成芯片。其中参与T细胞增殖、阳性选择的分子包括PTPN22、CTLT-4及HLA类分子。参与Th1细胞分化的分子包括IL-12、IRF5、STAT4、IFN-γ及Tyk2等分子。参与胆汁合成、转运及排泄的分子包括MDR1、MDR3、BSEP、MRP2、CYP、AE2等。（2）2004年7月到2011年8月共入组448例样本：PBC患者（134例），对照（314例）。（3）经病例-对照分析基因型频率分布，定位于BSEP基因的rs473351，两组具有显著性差异（P=0.004）。定位于STAT4基因的rs6748358，两组具有显著性差异（P=0.009）。定位于PTPN22基因的rs738409，两组具有显著性差异（P=0.020）。其余各点的基因型频率分布均无显著性差异。（4）经显性模型、隐性模型以及共显性遗传模型分析，BSEP基因的位点rs473351与PBC的易感性有关，其突变碱基A（dominant model: OR,2.063；95%CI,1.254-3.393; P=0.004）与PBC的易感性具高度相关性。位点rs2287618与PBC的易感性有关，其突变碱基A（dominant model, OR,0.617;95%CI，0.411-0.928; P=0.020）与PBC的易感性具高度相关性。STAT4rs6748358与PBC的易感性有关，其突变碱基A（dominant model, OR,1.567;95%CI，1.044-2.353; P=0.030）与PBC的易感性具高度相关性。（5）BSEP中rs473351与rs2287618具有高度连锁性LD (D’>0.9)它们与定位在BSEP的其他两个位点不存在连锁关系。多因子降解法分析显示：基因STAT4-PNPLA3位点rs738409、rs2235048、 rs2280714、 rs10181656次要位点组合的携带者，患病危险率显著高于其他人。基因BSEP-STAT4位点rs280519、rs473351、rs2280714、rs2461823、rs10181656次要位点组合的携带者，患病危险率显著高于其他人。（6）本研究纳入临床资料收集完整的PBC患者（96例），对BSEP基因多态性及临床指标（ALP、GGT、TBIL）相关性进行Logistic回归分析，结果显示，携带rs2287618次要等位基因的个体与ALP值呈正相关（P <0.05）。同时，携带rs2287618次要等位基因的个体对UDCA的应答水平降低，具有统计学意义。（7）对PBC相关抗体与BSEP基因多态性进行分析，结果显示，AMA阳性人群携带rs2287618次要等位基因的频率显著增高，二者具有显著性差异。同时，Sp100抗体阳性人群携带rs2287618次要等位基因的频率显著增高，具有统计学意义。而BPO、gp210等抗体阳性率与携带此位点次要等位基因频率比较，二者无显著性差异。主要细胞因子，我们对21例PBC患者和21例对照进行了Wilcoxon秩和检验分析。IL-4、IL-10的表达水平在病例组和对照组具有显著差异（P值分别为0.04，0.033）；IL-2、IL-12、IL-17检测结果显示，PBC组与对照组无显著性差异（P值分别为0.24，0.12，0.07）。进一步进行BSEP基因多态性与IL-4、IL-10表达水平的逻辑回归分析，结果没有显著差异。结论（1）从遗传易感性角度筛选到了PBC相关SNPs：rs473351、rs2287618、rs6748358、rs738409等，首次发现基因BSEP位点rs473351，STAT4位点rs6748358，PTPN22位点rs738409的基因型分布在中国PBC患者中存在显著性差异；等位基因同样存在显著性差异；说明这些位点多态性可能与PBC的发病机制有关。（2）首次对BSEP的基因多态性与PBC易感性关系的深入研究。遗传模型证实突变BSEP可能是参与PBC发病的候选分子。模型分析显示为BSEP基因位点rs473351、位点rs2287618，STAT4基因位点rs6748358，携带A等位基因的人群患PBC的风险明显增高。而rs473351的突变型致病性更强。由此可以看出，BSEP可能在PBC的发病过程中起着十分重要的作用。（3）BSEP基因的rs473351、rs2287618存在紧密连锁。进一步对其进行单倍型分析，结果显示单倍体AA（均为次要等位基因）显著降低了PBC的发病率。相反,如果患者出现GG单倍型，则其发病率显著增高。说明其对PBC的发病可能起到了不可忽视的作用。进行MDR分析后，同时携带分别定位于BSEP、STAT4基因的次要等位基因位点组合的人群患PBC的概率显著增高。同样，携带STAT4、PNPLA3基因的次要等位基因位点组合的人群发生PBC的概率显著高于其他人。这提示我们要对基因BSEP、STAT4以及其在免疫性疾病中的连锁关系高度关注。（4）ALP、GGT、TBIL是评估病情、判断预后的重要指标。首次对BSEP基因多态性与PBC相关临床指标进行逻辑回归分析，结果显示BSEPrs2287618与ALP具有相关性，提示BSEP rs2287618可能是PBC的独立危险因素。一致率检验显示，判别UDCA应答的两种标准（Barcelona标准和PairsⅠ标准）具有良好的一致性。首次进行BSEP基因多态性与UDCA应答率（采用Barcelona标准）的逻辑回归分析，携带rs2287618次要等位基因的个体对UDCA的应答水平降低。这些都提示：BSEP rs2287618具有重要的研究意义。（5）首次对BSEP基因多态性与PBC相关免疫指标AMA、BPO、Sp100、gp210进行逻辑回归分析，抗体AMA阳性率和Sp100阳性率在基因BSEPrs2287618突变的群体中显著增高。（6）肝脏病变部位浸润的淋巴细胞主要为CD4细胞，可能以Th1细胞为主。本实验首次进行了BSEP基因多态性与IL-4、IL-10表达水平的逻辑回归分析，结果没有显著性差异，这可能是由于入组样本量小造成的。