论文部分内容阅读
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.Pylori)感染和端粒酶(telomerase)激活作为与胃癌发生密切相关的两大热点因素，近年来得到了广泛深入的研究。但有关它们与贲门癌的发生关系及分子调控的研究尚未见报道。为探讨幽门螺杆菌感染和端粒酶激活与贲门癌发生发展的关系及在致癌过程中可能的分子调控机制，本研究选取了46例贲门癌手术切除标本，以胃镜活检标本的16例正常贲门粘膜；56例慢性贲门炎；10例贲门炎伴肠化作对照，进行初步研究。以期为探讨贲门癌的发病机制提供理论依据。本实验具体分为两部分： 第一部分幽门螺杆菌感染、端粒酶激活与贲门癌发生的相互关系方法： 1．用改良的Giemsa染色、HP-DNA-PCR扩增及快速尿素酶法，对贲门癌癌灶、癌旁、手术残端正常粘膜组织及胃镜活检对照组H.Pylori感染进行检测，用PCR扩增法对H.Pylori毒素相关蛋白基因A(Cytotoxin-associated protein A,Cag A)进行检测。 2．用TRAP-ELISA法、原位杂交(In situ hybridization)及免疫组化的方法对贲门癌、癌旁及残端正常粘膜中端粒酶活性、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶逆转录催化亚单位(hTERT)蛋白的表达进行检测。 结果： 1．三种方法检测H.Pylori感染结果显示：46例贲门癌癌灶、癌旁及郑州大学2002年博士研究生论文 幽门螺杆菌、端粒酶与贲门癌发生关系及其分子调节机制的研究 30例残端正常粘膜中H．P叫Ori阳性率分别为：58．70o（27／46）， 71．74O（33／46），66．670（20／30），三组间 均无显著性差异（P＞0．05）， 但明显高于胃镜正常对照组1入50W2八6八P＜0刀1）2．46例贡门癌C昭A卜性率为“．21％OO／46），胃镜贲门炎及贲门炎肠 化组CagA＊性率分别为引．79％（2／56），50＊0％（／10），16例胃镜正 常粘膜CagA阳性率为6刀0％门八6人上述各组与胃镜正常组比有 显著性差异瞩叼刀1卜3．33例H．Pylon卜性癌旁组织中，CagA卜性30例，阴性3例，经 统计学处理分析二者有相关性k乙33．98，P功刀1人4．贲门癌癌灶、癌旁及残端正常粘膜的端粒酶活性表达率分别为： 91．30o（42／46），39．13O（18／46），16．67％（5／30），平均二值分别为l．89 土0．41，1．49士0．43，O64土0．45，癌组与非癌组相b端粒酶活性表， 达有极显著性差异瞩功．01）5．盯R及h＊＊RT在贲门癌组织的表达率明显高于非癌组织O功N卜 且端粒酶活性与h＊＊RT表达有相关性什叫8刀1，＊叼刀1），h＊R与 hTERT表达经直线回归分析也有相关性，直线方程y＝心．230叩刀08X 7二48．39，P＜0刀1）。6．H．Pyl。i感染与各临床病理指标均无相关性①＞0．05），端粒酶活性与 贲门癌的分型及淋巴结转移有关瞩＜0刀1），与患者的年龄、性别、 肿块大小、肿瘤分期及浸润深度无关瞩功．05）。7．无H．Pylon感染贲门癌癌旁粘膜的hTR阳性细胞面积为0．08士0刀6， H．Pylon轻、中、重度感染癌旁粘膜hTR阳性细胞面积分别为：0．20 土0二0、0．24士0刀8、0．28 fo刀8，H．Pylon感染组hTR的表达明显高 于未感染组 （＜0．05）。其端粒酶二值分别为 0．006士 0．02、l．31土 0．21。 l．53 i 0．36、l．77土 0．08，H．Pylon感染组二值的表达明显高于未感染 组①叼＊），但在 H．Pylon感染组之间，不论感染强度如何二值和 二 郑州大学ZO口2年博士研究生论文 幽门螺杆菌、端粒酶与责门癌发生关系及分子调节机制的研究 h＊R表达均无差异瞩＞0刀5）。 8．伴有肠化的癌旁粘膜端粒酶活性表达率为 100刀0％的历） hTR阳性 细胞面积均值为0．ZI士0．10，高于不伴肠化者：30．00O（1竹0卜0．12 士0刀6O1刀5）H．Plylori感染程度从不伴肠化一肠化呈现上升趋势 o＜0刀5人H．Plylori感染强度与端粒酶活性及hTR的表达呈平行 关系。 第二部分：幽门螺杆菌感染、端粒酶激活的分子调节机制 方法： 1．用PCRSSCP法对贲门癌癌灶、癌旁粘膜及残端正常粘膜的P53基 因 5—8外显子（E－cons一引 的突变进行检测。 2．用原位杂交检测C－g C基因、免疫组化万法检测P53、C－啊C。 CyCllflDi、P。；肌”、bCI一2及 PCNA蛋白的表达情况口、 结果： 1．贡门癌组织p53基因EXOfls 一8的突变率为39．13％（18／4），P53蛋 白表达率为 47．83o（22／46）；癌旁分别为：4．35O（2／46）和 0．00O，正常 粘膜均为 0．00o。癌与非癌组相卜 （＜0．of）。 2．H．Pylon阳性粘膜中p53基因突变及蛋白表达率均高于阴性粘膜 （＜0刀1）。 3．hTR阳性组p53基因突变及蛋白表达率分别均高于阴性组，统计学 处理①＜0刀1）。 4．低分化腺癌p53基因突变及蛋白表达率较高分化腺