论文部分内容阅读
目的:探讨OA(oleic acid)对卵巢癌(ovarian cancer,OVCA)DDP耐药的影响及其作用机制,旨在为控制OVCA的网膜转移和DDP耐药提供新的靶点和思路。方法:1.应用CCK-8技术检测不同浓度OA对人OVCA细胞系A2780和OVCAR3增殖水平的影响。2.应用CCK-8技术检测PTX对A2780和OVCAR3细胞的IC50。3.选择DDP敏感型细胞系A2780和DDP耐药型细胞系OVCAR3作为研究对象,应用CCK-8技术检测OA对DDP和PTX耐药的影响,并分别以FABP4抑制剂BMS309403、PPARγ抑制剂GW9662进行相应的封闭实验。4.应用流式细胞术,采用Annexin V-FITC/PI双染法,检测OA对DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞凋亡水平的影响,并以FABP4抑制剂BMS309403、PPARγ抑制剂GW9662进行相应的封闭实验。5.应用Western Blotting法检测不同浓度OA处理不同时间对A2780和OVCAR3细胞中FABP4、PPARγ和ABCG2蛋白表达水平的影响。6.应用Western Blotting法检测OA及OA+PA处理不同时间对A2780和OVCAR3细胞核与胞浆中FABP4、PPARγ和ABCG2蛋白表达水平的影响。7.应用Western Blotting法检测OA处理A2780和OVCAR3后,对细胞中FABP4、PPARγ和ABCG2蛋白表达水平的影响,并分别以FABP4抑制剂BMS309403、PPARγ抑制剂GW9662进行相应的封闭实验。8.利用脂肪酸转运实验结合油红O染色定性和定量实验检测OA对人OVCA细胞脂肪酸转运的影响,并分别以FABP4抑制剂BMS309403、PPARγ抑制剂GW9662进行相应的封闭实验。9.收集不同FIGO分期的上皮性卵巢癌(epithelial OVCA,EOC)临床病理标本,采用免疫组化法检测FABP4、PPARγ和ABCG2的表达情况,并分析FABP4与PPARγ和ABCG2表达的相关性。结果:1.CCK-8实验结果显示OA对OVCA细胞系A2780和OVCAR3的增殖无显著性影响。2.CCK-8结果显示PTX对A2780和OVCAR3细胞的IC50分别为0.698μM和0.064μM。3.CCK-8结果表明OA(50μM,处理48 h)能显著增强A2780细胞对DDP的耐受性;OA(100μM,处理48 h和72 h)能显著增强OVCAR3细胞对DDP的耐受性;FABP4抑制剂BMS309403和PPARγ抑制剂GW9662可抑制此促进作用,揭示OA可能通过上调FABP4和PPARγ的表达,促进脂肪酸OA的转运,进而促进人卵巢癌细胞产生DDP耐药;OA不影响A2780和OVCAR3对PTX的耐受性。4.流式细胞术结果显示OA(A2780:100μM;OVCAR3:200μM)处理A2780和OVCAR3细胞24 h后,OVCA细胞的中晚期凋亡率无显著性变化,但可显著性抑制DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞凋亡,此抑制效应能被FABP4抑制剂BMS309403和PPARγ抑制剂GW9662部分消除,表明OA可能通过影响FABP4和PPARγ的表达,抑制OVCA细胞凋亡,从而抑制OVCA细胞对DDP的敏感性,增强OVCA细胞对DDP的耐受性。5.Western Blotting实验结果显示,OA(200μM,处理12 h)可显著性上调A2780和OVCAR3细胞中FABP4、PPARγ和ABCG2的蛋白表达水平。6.Western Blotting实验结果显示,单独OA以及OA与PA共存时可显著上调A2780和OVCAR3细胞核和胞浆中FABP4、PPARγ和ABCG2的蛋白表达水平。7.Western Blotting实验结果显示,200μM OA可促进A2780和OVCAR3细胞FABP4、PPARγ和ABCG2的蛋白表达水平。经FABP4抑制剂BMS309403和PPARγ抑制剂GW9662预处理2 h后,抑制了OA对人OVCA细胞系中ABCG2的蛋白表达的上调作用,表明OA可通过上调FABP4和PPARγ信号分子的表达来促进ABCG2的蛋白表达水平,从而促进OVCA细胞对DDP产生耐药。8.油红O染色实验结果表明,经200μM OA处理24 h后,可显著促进人OVCA细胞对脂肪酸OA的转运,FABP4抑制剂BMS309403和PPARγ抑制剂GW9662均可显著抑制OVCA细胞对脂肪酸OA的摄取能力。9.卵巢癌病理组织标本免疫组化染色分析表明,FABP4的表达与患者的卵巢癌FIGO分期、腹水转移和淋巴结转移情况呈正相关;FABP4的蛋白表达水平与PPARγ和ABCG2的蛋白表达水平呈正相关。结论:本研究通过人OVCA细胞体外实验和卵巢癌临床病理组织标本分析,揭示了OA可能通过FABP4/PPARγ/ABCG2信号通路上调ABCG2的蛋白表达水平,进而促进卵巢癌细胞对DDP产生耐药。该研究提示FABP4和PPARγ可能成为改善卵巢癌DDP耐药的新靶点。