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前言 在肝脏移植和肝脏外科手术中，肝脏缺血再灌注(hepatic ischemia reperfusion，HIR)是引起肝脏损伤的一个重要因素。尽管目前，肝脏缺血再灌注造成肝脏损伤的机制没有完全阐明，但它与再灌注阶段活性氧的产生、微循环的改变、白细胞的浸润和激活有很大的关系。 一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种内皮衍生性舒张因子，它是在一氧化氮合酶(NOS)的作用下经L-精氨酸到L-瓜氨酸途径生成。目前，NO在缺血再灌注中的作用仍存在着争议。一些学者认为，NO在不同器官、组织和细胞的缺血再灌注中发挥了保护作用；而另一些学者却认为，NO没有作用，甚至有害的作用。这些争议是由于NO具有双重的作用。一方面，它可以舒张血管改善微循环，并可作为细胞毒性超氧自由基的清除剂，而且可以降低中性粒细胞的粘附；另一方面，NO可与超氧化物互相作用导致一种更强氧化分子过氧亚硝酸根的产生，导致组织细胞的损害。 本实验中，我们通过大鼠肝脏缺血再灌注的模型，研究内源性NO在此过程中对肝细胞和内皮细胞的作用，是否起到了保护作用或损害作用，进而为临床工作提供一些理论依据。 实验材料与方法 1．材料 1．1 实验动物：Wistar大鼠，雌雄不限，体重约250g。 1．2 实验用药：异戊巴比妥钠盐，L-精氨酸(L-arg)，L-硝基一精氨酸（L－NNA） 二．3 实验试剂： 丙H醛（MDAX透明质酸（HA）和NO试剂盒 2．大鼠肝脏缺血再灌注模型的制作、分组与给药： 2．l 模型的制作：Wistar大鼠，约 2509，实验前 12 ／J’时禁食，自由进水。用异戊巴比妥钠80mglKg腹腔注射麻醉，并固定，取上腹正中切口进腹，暴露第一肝门部，游离肝十二指肠韧带，用无损伤动脉夹夹闭包括门静脉、肝动脉和肝管的肝蒂。致肝脏完全缺血40分钟后，松开动脉夹，造成再灌注，并与一小时后经门静脉采血、采标本用于检测。 2．2 分组与给药：实验将大鼠随机分成四组：厂）假缺血再灌注组u组，n＝8，）只行手术，不予夹闭，并于术前尾静脉注射生理盐水 SlllHKg八 2）缺血再灌注组VR组，n＝8）按照模型的制作过程，行肝脏的缺血再灌注，并于术前尾静脉注射生理盐水srnl／Kg；（3）L一呷给药组K组，n。8）手术同 I／R组，术前 L一鸣100mg／Kg尾静脉注射；（4）L－NNA给药组州A组，n＝8）手术同I／R组，术前L－NNA 10mg／Kg尾静脉注射。 3．检测指标：血清NO的测定，肝组织MDA含量的测定，血清HA的测定，血清ALT、AST和LDH的测定。病理形态观察及肝组织中中性粒细胞（PMN）计数。 4．统计学处理：所有数据以二。S表示，并用 SPSSll．0统计软件单因素方差分析处理，P＜O．05表明有显著性差异。 实验结果 二．大鼠在肝脏缺血再灌注损伤时血液及肝组织中各种 检测指标值的变化水O浓度在给予L一团唱后，较I／R组与S组有显著性差异u＜o．05人肝组织中＊＊A含量，在广R及＊A ·2·组中较S组明显升高（P＜0．05X而在L－rg组中较I／R组显著下降（P＜O．05人血清中以含量，在＊R组及＊A组中较S组明显升高（P＜0．05人而在 L－rg组中较 VR组显著下降u＜0．05人2．各组大鼠在肝脏缺血再灌注损伤时肝组织中PMN计数：在＊R组人组及＊A组中较S组明显升高（P＜o．05人而A组较广R组明显降低（P＜o．05），并且＊A组较＊R组明显升高（P＜O．05）。 3．各组大鼠在肝脏缺血再灌注损伤时肝功能测定：血清中ALT水平在 I／R组及 NA组中较 S组明显升高（P＜0．05L同时NA组较I／R组明显升高（P。J．05厂血清中AST水平在UR／与＊A组较S组有显著性差异（P＜0．05入而A组中较UR组明显下降（P＜O．05），同时，＊A组较＊R组明显加重（P＜o．05）；血清中＊H水平在＊凡A与＊A组较S组有显著性差异门＜o．陀L而＊A组较＊R组明显加重（P＜o．扔入 4．光镜下组织学改变：假缺血再灌注组肝细胞，肝窦内皮细胞形态均正常少R组肝脏淤血明显，肝细胞索、肝窦分界不清，同时，肝细胞可见不同程度的肿胀变性和脂肪变性，可见灶性坏死和溶解性坏死；A组肝细胞损伤明显较I／R组轻，而NA组与I／R组无明显差别。 讨 论 本实验结果显示，肝脏缺血40分钟再灌注60分钟后造成严重的肝脏损伤。表2中显示I／R后ALT、AST和LDH显著升高；相反，给予L－rs后各项指标均下降，而给予L－NNA后上升。组织学方面，肝脏坏死和淤血的程度在给予t－rs后明显改善，而给予L－NNA后无改变。高倍镜下PMN计数在L－w中也明显下降。由此认为，通过L—rs预处理后，内源性NO浓度升高， ·3·进而减轻UR造成的损伤而起到了肝脏保护作用。根据本实验结果NO的增高保护I／R后的肝脏，究其机制可能与如下因素有关： ＊NO在肝脏I／R损伤中的作用可能与它的超氧化物清除特性有关。NO是一种反氧化剂，它可以与许多超氧化物、自?