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研究背景:丁香(Flos Caryophylli)系桃金娘科番桃属植物丁香(Eugenia caryo-phyllataThunb.)的干燥花蕾,又称公丁香。味辛,性温、归脾、胃、肾经。丁香属于中药中的温里药,具有温中驱寒、补肾助阳、温通血脉的功效,用于治疗脾胃虚寒,呃逆吐泻,心腹冷痛,肾虚阳痿。丁香气雄而善行,故上可达心肺“疗胸痹”(《本草汇》),下可入肝肾“疗肾气,奔豚气,阴痛,壮阳暖腰膝”。丁香与郁金为主药的丁郁四神散可以治疗冠心病心绞痛,具有缓解心绞痛,改善心电图异常等方面的作用。丁香挥发油的主要成分为丁香酚,其相对含量可达80.33%。丁香酚可通过非竞争性对抗Ca2+催化反应,抑制羟自由基形成,保护细胞膜脂质免受氧化。丁香酚对Fenton反应生成的羟自由基有明显的清除作用,其活性高于羟自由基特异性清除剂甘露醇,其对核黄素-甲硫氨酸光照还原生成的活性氧也有清除作用,可以作为外源性的氧清除剂使用。日本的一项研究发现丁香酚可抑制黄嘌呤氧化酶活性,亦抑制化学产生超氧化物,因此认为其可直接捕获超氧化物。本课题考虑丁香酚是否可以通过清除心肌缺血/再灌注损伤产生的氧自由基而起到保护受损的心肌细胞的作用,值得进一步研究。研究目的:本实验采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞的影响,为丁香酚对心血管疾病的作用提供实验依据。研究方法:原代培养乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,用倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化,四唑盐(MTT)法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(MMP),并测定其细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力,从而观察丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞的影响。研究结果:心肌细胞经Na2S2O4造模后细胞存活率、MMP、SOD含量下降,LDH、MDA升高。模型组细胞存活率、LDH与正常组相比,差异有显著的统计学意义(P<0.001),模型组细胞MMP、MDA含量、SOD活性与正常组相比,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,丁香酚能显著提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的细胞存活率,有降低LDH、MDA含量和提高SOD、MMP的趋势。研究结论:丁香酚能够显著提高由Na2S2O4造成的缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,能在一定程度上降低损伤心肌细胞的LDH漏出量和MDA含量,有提高SOD活性和稳定心肌细胞MMP的趋势,提示丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞有一定的保护作用。