[背景]外泌体(Exosomes)是由多种细胞脱落并释放的大小均一的小囊泡样物质,直径约在30-150nm之间。外泌体的外层结构为脂质的双分子层膜其可以保护里面的内容物质免于降解,其囊泡内携带有脂质、蛋白质、mRNA、miRNA、siRNA等生物大分子物质并能通过受体介导、直接弥散或者内吞作用等方式来进入目的细胞进而发挥其作用。外泌体的最早发现是由Pan等人于1985年在成熟的哺乳动物的网织红细胞中观察到。此后研究学者们发现很多细胞都可以产生外泌体并且在血液、尿液、腹水等体液中均能够检测到,至今人们对于外泌体在临床疾病的诊断和治疗中的意义以及外泌体的功能以及外泌体在各方面的应用依然还处在起步的阶段,其确切的生物学功能依旧还在探索中。至今为止已经发现绝大多数的细胞都能够分泌外泌体包括肿瘤细胞,并且肿瘤细胞与正常的细胞相比,肿瘤细胞能释放更多的外泌体。在外泌体的功能方面,现已发现其可以作为细胞间蛋白质和RNA转运的载体,而且现在已经有大量的研究证实外泌体可参与细胞之间的信号传递过程以及免疫相关中的抗原呈递过程甚至在肿瘤的生长及迁移等过程也有着参与。在人体的免疫系统中细胞免疫是极为重要的一部分,它能够阻止病原菌的入侵并且还能够将癌变的细胞或者组织清除掉。在细胞免疫中CD4+T细胞发挥着核心的作用有着举足轻重的地位,它能够辅助B细胞产生抗体,提高巨噬细胞的吞噬能力,还能够聚集中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞到炎症感染部位,并通过其生产的细胞因子和趋化因子,来协调免疫过程。甚至其在肿瘤相关方面也发挥着尤为关键的作用,CD 4+T细胞不仅有着辅助细胞毒T细胞的功能还能帮助NK细胞来清除癌变的细胞或者组织甚至还能够杀灭它们,其还能够不凭借着CD8+细胞毒性T细胞进而来发挥消灭癌变的细胞或者组织的作用。研究发现:CD 4+T细胞不只是功能相对简单的一类细胞,而是一类具有着极为复杂功能的细胞群。但现阶段关于CD4+T细胞外泌体的研究很少有人涉及,CD4+T细胞是否具有着分泌外泌体的能力?若其能够分泌外泌体,那么其分泌的外泌体在CD4+T细胞参与的肿瘤免疫过程中发挥怎样的作用?国内外还末见报道。[目的]探讨CD4+T细胞是否具有分泌外泌体的能力,并初步分析其意义。[方法]本实验利用从小鼠脾脏细胞中分离到的CD4+T细胞,尝试提取其培养基上清液中的外泌体,然后在透射电镜下看能否观察到CD4+T细胞外泌体,并进一步鉴定分析。1、从小鼠脾脏细胞中利用磁珠分选的方法提取出CD4+T细胞,并用流式细胞仪进行鉴定分析2、将得到的小鼠CD4+T细胞饥饿处理48小时,从其上清液提取外泌体。3、将得到的小鼠CD4+T细胞外泌体在透射电镜下观察。4、Western blot检测小鼠CD4+T细胞外泌体特异性标志蛋白CD9的表达。5、PCR检测小鼠CD4+T细胞外泌体中miR-23a、miR-214,这2个与炎症及肿瘤相关的miRNA的表达。[结果]1、利用磁珠分选的方法从小鼠的脾脏细胞中分离出的CD4+T细胞纯度为90.1% ±5.8%。2、在透射电镜下观察到CD4+T细胞外泌体形态为大小不一的圆形或椭圆形,其直径约在80nm左右,在其外面可见到有一层明显的膜性结构,在其腔内则可见到低电子密度的成分。3、Western blot证实小鼠CD4+T细胞外泌体中能检测到CD9蛋白表达。4、PCR证实小鼠CD4+T细胞外泌体中能检测到miR-23a、miR-214的表达。[结论]1、小鼠CD4+T细胞具有分泌外泌体的功能。2、在小鼠CD4+T细胞分泌的外泌体中能够检测到miR-23a、miR-214,这2个与炎症及肿瘤免疫相关的miRNA的表达,由此推测小鼠CD4+T细胞的外泌体可能参与了 CD4+T细胞炎症及肿瘤免疫过程。