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甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Hübner),属鳞翅目夜蛾科,是一种世界性分布的害虫。其取食范围非常广泛,对多种粮食作物、蔬菜、经济作物和油料作物等造成严重危害。昆虫几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是几丁质的修饰酶之一,可水解几丁质中的乙酰胺基,将几丁质降解成脱乙酰几丁质,是昆虫几丁质代谢中的一种关键酶,在昆虫的多种生理活动中发挥重要作用。本研究以甜菜夜蛾S.exigua 5龄幼虫中肠为材料提取总RNA,利用RT-PCR及RACE技术,扩增得到甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶1(chitin deacetylase 1)基因的c DNA全长序列,Gen Bank登录号为KJ621414。该基因全长1659bp,包括一个1554bp的开放阅读框,编码518个氨基酸,N-端具有23个氨基酸的信号肽序列,预测蛋白(Se CDA1)分子量为61.5k Da,等电点为4.83;NCBI BLAST分析结果表明,Se CDA1含有低密度脂蛋白结合区(LDLa)、几丁质结合区(Ch BD)和脱乙酰基酶催化区(CDA),属于GroupⅠ类CDA蛋白。氨基酸序列分析发现,该序列分别含有3个N-联糖基化位点和5个O-联糖基化位点。secda1基因能够在原核细胞中表达61.5k Da目的蛋白,免疫家兔获得Se CDA1蛋白的特异性抗体。secda1基因在毕赤酵母细胞中表达80k Da的目的蛋白。构建重组杆状病毒表达载体p Fast Bac-secda1,Western blot分析表明secda1基因在昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4(High Five)中成功表达80k Da蛋白。脱乙酰基酶活性测定结果显示昆虫细胞表达的Se CDA1蛋白及毕赤酵母表达的Se CDA1蛋白均具有脱乙酰基酶活性,分别为1.88U/m L及1.35U/m L。利用Se CDA1特异性抗体对Se CDA1进行免疫组织定位显示,Se CDA1蛋白在卵、幼虫和蛹期中均有表达。q PCR结果显示secda1基因在卵、幼虫和蛹期中均有表达,而在卵中表达量最高,在5龄幼虫头、中肠、马氏管、脂肪体中也有表达,且在体壁中表达水平最高,推测Se CDA1可能参与卵的孵化及幼虫蜕皮过程。为进一步验证Se CDA1蛋白功能,利用RNA干扰(RNAi)技术将secda1 536bp保守序列克隆至p GEM-T载体,成功构建了RNAi重组质粒,大量提取纯化重组质粒,经线性化后合成ds RNA-secda1,为下一步功能研究提供了材料。