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壳聚糖(chitosan)和聚乳酸(poly-lactic acid,PLLA)都是可生物降解的高分子材料。在聚乳酸膜上通过等离子偶合反应在其表面修饰上壳聚糖分子,形成Chi-PLLA膜,然后在膜表面培养一下两个细胞系:L929细胞(小鼠成纤维细胞)和L02细胞(人类肝细胞),发现这两种伸展型细胞在Chi-PLLA膜上很难黏附和伸展,趋向于圆球形。通过测定这两种细胞在Chi-PLLA膜上的生长曲线,发现虽然Chi-PLLA膜对细胞缺乏黏附性,但与玻璃表面培养的细胞对照相比,增殖速度几乎一样。这个现象是首次发现,因为以前的观点认为伸展型细胞如果不能黏附时增殖速度非常缓慢。因此,我们可以预见Chi-PLLA膜在控制细胞形态、功能和组织工程方面的应用前景,有助于研究细胞生长与分化的相转变机制。
通过紫外聚合在PLLA膜的表面修饰上二甲氨基甲基丙烯酸乙酯(DMAEMA),形成DMAEMA-PLLA膜。因为DMAEMA分子有氨基,DMAEMA-PLLA膜通过静电作用与带负电的鲑鱼精DNA分子结合。通过红外光谱对膜的表面结构进行表征,将PLLA膜、DMAEMA-PLLA膜和DNA-DMAEMA-PLLA膜的表面结构进行对比,对比结果显示DMAEMA与PLLA膜的紫外偶联和DNA与DMAEMA-PLLA膜静电结合都是高效的。接着在三种膜上培养L929细胞,并观察细胞在三种膜表面的形态变化,发现L929细胞在DMAEMA-PLLA膜上也不能正常黏附并伸展,而且在培养一定时间段后开始死亡;而在DNA-DMAEMA-PLLA膜上,L929细胞能够黏附并伸展,虽然伸展的速度相对单纯的PLLA膜来说要慢,但是细胞不会死亡。于是,用台盼兰染色法对膜的细胞毒性进行评估,发现DMAEMA-PLLA膜对L929细胞具有较为明显的毒性,而:DNA-DMAEMA-PLLA膜没有细胞毒性,说明鲑鱼精DNA能中和DMAEMA-PLLA膜的细胞毒性。在以上发现的基础上,用pSV-β-galactosidase质粒DNA替换鲑鱼精DNA重复实验。将细胞在DNA-DMAEMA-PLLA膜上培养48小时后进行收集,然后破细胞,对细胞抽提物进行ONPG显色反应。对显色结果的分析发现DMAEMA-PLLA膜能够促进质粒DNA进入细胞并表达,也就是说DMAEMA-PLLA膜能够提高质粒DNA对细胞的转染效率,这个结果以前的文献中还没有报道过。因此,DMAEMA-PLLA膜是一种既能控制细胞形态、又能促进基因转染的组织工程材料。