DNA醛基突变的化学荧光检测及酸性磷酸酶的检测新方法

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在本论文中,对有关核酸和蛋白质的一些检测工作进行了详细的探讨。作为遗传信息主要的载体和表现形式,核酸和蛋白质一直都是化学生物学学科中重要的研究内容,这些研究的内容跟人类的生活和健康密切相关。本文的研究内容主要分为三个大的部分,前两个部分以核酸主要是以DNA作为研究目标物,最后一部分则是以蛋白质的一个门类即蛋白酶类作为研究的重点。第一个部分主要研究的内容有:作为DNA甲基化和去甲基化过程中重要的中间产物即醛基胞嘧啶被发现多存在于一些生物的胚胎干细胞和神经元细胞中,它不论是在细胞分化还是作为羟甲基胞嘧啶的重要氧化产物都在各自的生物反应活动中起着至关重要的作用。细胞的分化过程会伴随着明显的醛基胞嘧啶含量的变化,尤其是在分化的初期会发现大量的醛基胞嘧啶的存在,此外作为醛基胞嘧啶的前体的甲基胞嘧啶和羟甲基胞嘧啶则被认为是很多疾病特别是癌症的重要生物标志物,正常细胞和癌细胞甚至于不同种类的癌细胞中的含量都会有着明显的差异,所以作为直接的经TET酶催化氧化的产物,醛基胞嘧啶的含量变化直接关系着人类疾病的诊断和检测。而我们就提出了使用化学荧光的方法去检测DNA中的醛基胞嘧啶及其含量。首先我们合成了三个羟胺类的荧光分子作为探针,分别为化合物1、2和3,并将其用于DNA中醛基胞嘧啶的检测。而且通过不同的手段,例如HPLC、变性凝胶电泳、DNA质谱和荧光检测等,证明了该方法的有效,灵敏和可以定量的特点。除此之外,还探讨了将此方法应用到检测基因组DNA中的醛基胞嘧啶的可能性,并证明了合成的荧光探针3确实可以与基因组DNA中的醛基胞嘧啶反应。第二部分的主要内容包括:醛基尿嘧啶作为DNA中常见的氧化损伤突变碱基,检测其存在具有重要的意义。而通过荧光检测的方法得到的天然碱基的荧光衍生物因为其与天然碱基的结构相似性以及可以通过荧光检测的优点被广泛的应用到各种生命过程的研究中。在这部分的实验中,首先用邻苯二胺类化合物合成了一系列的醛基尿嘧啶的荧光衍生物dUbmz,并且详细研究了它们的紫外和荧光性质以及取代基、pH值和溶剂对紫外和荧光性质的影响。鉴于邻苯二胺和醛基尿嘧啶反应产物的良好荧光性质,我们将对甲氧基邻苯二胺用于选择性检测醛基脱氧尿苷。第三部分的主要内容包括:酸性磷酸酶作为蛋白质酶类被认为是很多人类疾病重要的生物标志物,譬如前列腺癌、肾病和关节炎等。所以找到一种新型的更方便、更灵敏和更廉价的检测方法就成为了研究的重点。本文则利用一种廉价的无机盐六偏磷酸钠作为聚负离子体来使得带有正离子的荧光分子化合物14通过静电作用聚集在一起进而荧光被淬灭,这就是ACQ效应。而加入酸性磷酸酶后,六偏磷酸钠的磷酸酯键则被水解成磷酸根从而无法继续使化合物14聚集结合,释放出化合物14的同时荧光也得到了恢复,从而达到了荧光检测酸性磷酸酶的效果。
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