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TALE(Transcription activator-like effector)作用机理的阐明,为人工体外组装蛋白识别目标DNA序列提供了可行的方法。TALE与不同功能结构域的组合为基因的定点突变、目标基因的表达调控等提供了有效的工具。本论文围绕TALE模块改造、TALE识别区序列组装、TALE在启动子区域的结合位置对基因表达的影响及采用Golden Gate assembly(GG)组装方法进行多基因表达载体构建进行了研究,主要结果如下: 1、根据密码子的简并性,改造了部分用于TALE组装用的模块。已成功改造22个,占总组装模块的55%。通过后续实验证实,改造后的模块组装成的TALE能很好的在烟草中工作。 2、以拟南芥热激基因HSP18.2启动子为目标序列,组装不同的TALE-VP16蛋白分别结合在启动子上的不同位置,发现结合在热激元件和TATA box上的TALE-VP16转录效果最强。两个或以上TALE-VP16结合同一启动子不同位置会对转录产生影响。 3、获得分别采用TALE-VP16(结合序列在的TATA box附近)和CaMV35S控制的PI基因表达的转基因植株,发现TALE-VP16指导的PI基因表达与CaMV35S启动子指导的PI基因的转录本存在差异。 4、利用Golden Gate assembly(GG)组装的方法对AP1,AP3,PI,SEP3四个基因的表盒进行组装。对筛选的转基因植株进行表型观察,发现HSP18.2核心启动子能启动基因的表达,使植株表现早花且出现花器官变异。