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弓形虫属于人兽共患寄生原虫,易引起人类和动物流产,免疫抑制宿主感染后易发生急性弓形虫病,从而导致经济损失,严重威胁公共健康。关于中国猪和猫的弓形虫病已有一些报道,为进一步了解弓形虫病流行病学及虫株的致病机制,本研究调查中国河南、山东及上海地区猪(2838份)和河南家猫(28份)的弓形虫感染情况、分析风险因素、分离弓形虫虫株,并研究分离虫株对小鼠小肠的损伤机制。 猪和家猫弓形虫的血清流行病学及风险因素分析:郑州市家猫心脏(28份),河南地区猪心脏(305份)和膈肌(2086份)及血液样品(407份)共2798份,山东(10份)和上海(30份)血液样品。采用MAT方法检测血清和膈肌洗液弓形虫抗体,并对地区、性别及年龄进行风险因素分析。结果:猪和家猫弓形虫抗体的总阳性率分别为10.08%(286/2838)和7.14%(2/28)。其中河南省猪弓形虫阳性率为9.94%(278/2798),山东省10.00%(1/10),上海市23.33%(7/30)。地区和年龄与猪感染弓形虫差异显著(P<0.05),而性别与弓形虫感染无明显差异(P>0.05);家猫感染弓形虫与年龄和性别均无显著相关性(P>0.05)。 猪和家猫弓形虫虫株的分离。MAT滴度≥25的猪心肌4份(4/305)、猫心肌2份(2/28)和2086份猪膈肌样品分别接种小鼠,并采用PCR及Nest-PCR方法检测消化液内弓形虫。结果:猪膈肌接种组有3组弓形虫抗体呈阳性(3/81),猫心肌接种组有1组弓形虫抗体为阳性。3份猪膈肌消化液含有弓形虫核酸。从猪组织中未分离到弓形虫虫株,猫心肌中分离到弓形虫TgCatCHn4(ToxoDB#9)。TgCatCHn4包囊接种野生型BALB/c小鼠后存活时间超过60天,而接种IFN-γ-/-小鼠可引起其急性感染死亡(16DPI),肺脏和肠系膜淋巴结中可见多量弓形虫速殖子。说明TgCatCHn4虫株毒力弱,IFN-γ-/-小鼠感染后存活率低。 TgCatCHn4弓形虫卵囊对小鼠小肠的病理损伤特点。以VEG虫株作为参考,104个VEG和TgCatCHn4弓形虫卵囊灌胃BALB/c小鼠,分别在6HPI、1DPI、3DPI和8DPI取小鼠小肠并固定,采用苏木素与伊红对比染色法和免疫组织化学方法,研究弓形虫感染后小肠损伤特点、弓形虫抗原分布及潘氏细胞溶菌酶的表达。结果:随着小鼠感染时间的延长,VEG虫株在8DPI时对回肠损伤最重,与VEG虫株相比,TgCatCHn4弓形虫对小鼠肠道损伤较轻。两种虫株的弓形虫抗原分布与肠道损伤不呈正相关。两个虫株组的小鼠回肠潘氏细胞数及其颗粒数均表现为先减少(6HPI),后增加(3DPI),最后又减少(8DPI),但无明显差异(P>0.05)。TgCatCHn4感染小鼠后,小肠溶菌酶表达缺失,而VEG虫株感染小鼠小肠溶菌酶在6HPI和1DPI时均为阳性表达,后逐渐减少。表明:弱毒株弓形虫可以抑制潘氏细胞溶菌酶的表达,推测溶菌酶的缺失与弓形虫成功入侵肠道有关。