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背景和目的 肾脏替代治疗已明显改善了肾衰竭患者的预后,使急性肾衰竭(ARF)死亡率降低至30%。但当合并MODS/MOF时,死亡率仍高达60%-100%。面对严峻的挑战,人们设想并已证明这与目前的人工肾治疗仅仅代替了肾小球滤过功能,而忽略了肾小管的替代,不能完成内分泌、代谢、自身调节等多种功能有关。随着细胞治疗和组织工程学的兴起,人们运用组织工程技术构建生物人工肾小管辅助装置(RAD)来完善、补充现有的人工肾之不足。国际上,美国1997年Humes首次用犬肾近端小管细胞株(MDCK)构建RAD,国内本单位于2001年用猪肾近端小管细胞株(LLC-PK1)构建RAD成功。但用猪肾小管细胞构建的RAD,因为是异种生物细胞,不适用于临床治疗。本研究用原代培养的人肾近端小管细胞构建成功RAD,将其应用于整体动物MODS猪模型,观察疗效,为进一步临床试用RAD提供必备的技术平台和实验数据。 材料和方法 (1) 细胞培养 原代培养人肾近端小管细胞,传代并鉴定;(2) 构建RAD用培养的人肾近端小管细胞构建RAD;(3)制作MODS合并ARF猪模型 采用盲肠结扎和穿孔(CLP),加双侧输尿管结扎术(UL)。证实该模型达到MODS诊断指标;(4) RAD治疗 用人肾近端小管细胞构建的RAD,与人工血滤器相连,对ARF合并MODS猪行RAD串联CVVH(连续性静-静脉血液滤过)的治疗。(5) 观察指标 血清Cr、BUN,电解质,血气,血清抗炎因子IL-10、致炎因子TNF-α水平,动物存活时间。(6) 设立对照组 分为RAD治疗组(A组)前后自身对照;假RAD治疗组(B组);未血液净化治疗组(C组)三组。 结果1 分离纯化人肾近端小管细胞(PTC),培养5-6天后融合成单层细胞,形态呈鹅卵石样,可传代7-9代,鉴定证实为人肾近端小管细胞,重复培养10次,均能稳定获得同样细胞,每克肾皮质可分离培养出6-12×10~6个PTC。