论文部分内容阅读
阿尔茨海默病(AD)是一种发生在老年人中的神经退行性疾病,临床上主要以进行性认知功能减退为主要表现,其典型的病理特征为β淀粉样蛋白(Aβ)为核心的老年斑、神经纤维缠结以及神经元死亡。目前公认的Aβ沉积是AD形成的最终通路,而钙稳态失调能够导致神经元结构以及功能发生改变,甚至导致神经元的不可逆性损伤。近年来的研究发现经典瞬时受体电位(TRPC)通道是一类位于细胞膜上的非选择性钙离子通道,在大脑神经元中高度表达,并且研究表明TRPC通道在神经系统中主要参与增殖、分化、凋亡、退行性变和突触可塑性等方面的功能。但是,在Aβ诱导的AD小鼠模型中,TRPC通道蛋白的表达情况以及功能机制目前还尚不清楚。目的探讨经典瞬时受体电位(TRPC)通道蛋白在Aβ1-42诱导的阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区中的表达情况。方法1.雄性5周龄ICR小鼠36只,适应性喂养5天后,将其随机分为AD组和对照组,每组18只。2.应用Aβ1-42侧脑室注射制作AD小鼠模型,侧脑室注射第十天后进行Morris水迷宫定位航行和空间探索实验测定小鼠学习记忆能力,行为学检测后处死动物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马区TRPC1～TRPC7mRNA的表达情况,运用免疫荧光和Western blot等实验技术检测小鼠海马区的TRPC4通道蛋白的表达。结果1.Morris水迷宫行为学检测结果显示,在定位航行实验中,从第三天开始,与对照组相比,AD组小鼠水迷宫测试的逃避潜伏期延长(P<0.05),寻找平台游泳路程较长(P<0.05),在空间探索实验中,与对照组相比,AD组在目标象限停留时间明显缩短(P<0.01),穿越平台次数明显减少(P<0.01)。2.RT PCR检测结果显示,在对照组及AD组中,TRPC1～TRPC7通道mRNA均有不同程度的表达,与对照组相比,AD组TRPC4mRNA表达明显增高(P<0.01)。3.免疫荧光结果显示TRPC4通道蛋白广泛表达在海马区的神经细胞膜上,且与对照组相比,AD组TRPC4荧光强度增强。4.Western blot结果显示,与对照组相比,AD组TRPC4通道蛋白表达增高(P<0.05)。结论侧脑室注射Aβ1-42寡聚体后,小鼠学习记忆功能减退,海马区TRPC4通道mRNA及蛋白表达含量均增加,表明TRPC通道参与到因Aβ沉积而导致的AD发病机制中。