白背三七多糖及黄酮的提取测定与降血糖作用研究

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本文以岳阳植物白背三七干燥植株为原料,对白背三七多糖的提取、分离、纯化、分子量测定及黄酮的提取测定、两者降血糖药理作用进行了研究探讨。通过大量基础实验探讨,首次建立了白背三七总黄酮(TFGD)和白背三七多糖(PGD)的优化提取方案。实验结果表明白背三七总黄酮的优化提取条件为:乙醇浓度70%,溶剂用量1:12,提取2次,每次1.5 h,在此条件下白背三七总黄酮得率为3.0%。白背三七水溶性多糖最优提取工艺为:温度90℃,提取时间2.5 h,提取2次,固液比1:9,在此条件下总多糖得率为1.49%。通过对脱蛋白、醇沉、脱色效果进行考察,优化白背三七多糖分离纯化方案。实验结果表明:75%乙醇沉淀多糖得率较高;采用活性炭脱色,温度80℃、脱色45min、活性炭质量分数15%、脱色2次,脱色效果最好;如采用双氧水脱色,则温度60℃、脱色120 min、双氧水加入量为多糖溶液体积的70%,脱色效果最佳。两种脱色方法各有利弊,仍有深入研究的空间。样品多糖采用DEAE-52柱层析得PGD-1、PGD-2、PGD-3,PGD-2继以Sephadex G-100柱层析,得一单峰。本课题首次采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPGFC-ELSD)检测白背三七多糖的重均分子量。采用T5、T10、T20、T40、T70标准葡聚糖系列以重均分子量对数值对保留时间绘制标准曲线,测得白背三七多糖重均相对分子质量(Mw)。实验结果表明Mw在5 000-70 000范围内,方法线性良好,所得标准曲线回归方程为:lgMw=-0.2805tR+3.2924,r=-0.9804,测得样品多糖重均分子量为26242。该法操作简便,方法重现性较好,准确性较高。本文对糖尿病小鼠建模条件进行了优化,采用雄性小鼠为实验对象,高脂喂养结合腹腔注射四氧嘧啶生理盐水溶液建立糖尿病小鼠模型,方法成模率高,死亡率较低,且较符合Ⅱ型糖尿病患者发病特征。建模成功后采用连续灌胃给药方式考察白背三七多糖和总黄酮提取物的降血糖效果及小鼠耐缺氧能力,研究结果表明白背三七多糖和黄酮具有较好的降血糖和耐缺氧效果。白背三七为民间使用药材,湖南岳阳地区众多Ⅱ型糖尿病患者长期食用,有效控制了血糖升高,但当前对其研究较少。本课题对白背三七多糖及黄酮进行提取分析测定及降血糖药理研究,期望为该植物资源的开发利用提供科学依据。
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