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一、研究背景胆囊结石病(Gallstone,GS)是一种由胆囊胆汁代谢异常引起的疾病,胆囊胆固醇结石为其主要的临床症状。当前治疗胆囊胆固醇结石最有效的手段是手术,但手术治疗为有创治疗,会导致体内部分的器官缺失和消化功能的下降,改变生理解剖结构,并有可能引起胆汁反流。因此,探究胆囊胆固醇结石的发病原因,了解其形成机制,对胆囊胆固醇结石的预防及治疗有非常重要的意义。辣椒碱作为辣椒的主要活性成分,目前有研究表明,它具有多种生理功能,能减少脂肪聚集,减低血压,使心血管得到一定保护,还可以促进新陈代谢、加快能量消耗,及降低胆固醇。辣椒碱是TRPV1的激动剂,能够降低胆固醇代谢过程中的关键限速酶HMG-Co A还原酶,还具有上调肝脏中CYP7A1表达和促进胆固醇向胆汁酸的转化的作用。辣椒碱还具有一定的抗炎作用。但是,目前有关辣椒碱预防胆囊胆固醇结石的研究还未见报道,其作用效果也不明确,作用机制有待进一步研究。二、研究目的本课题旨在建立由高脂饲料诱发C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石的动物模型,并以此为基础研究辣椒碱对于胆囊胆固醇结石的预防及治疗机理,为辣椒碱成为一种新的、有潜力的预防胆囊胆固醇结石病的药物提供实验依据。三、材料与方法选取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为三组,分别喂养饲料:对照组为标准饲料,模型组为标准饲料+致石饲料,治疗组为标准饲料+致石饲料+辣椒碱。喂养8周后,检测各组小鼠血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白的含量。偏振光显微镜观察各组胆囊胆汁胆固醇结晶情况。采用免疫组化的方法分别检测各组胆囊壁组织COX-2、MUC5AC、TRPV1表达情况;并检测肝脏组织CYP7A1、HMG-Co A还原酶、TRPV1表达情况。运用组织病理学检查的方法观察胆囊粘膜炎症程度。并通过Western-Blotting的方法检测肝脏组织中CYP7A1、HMG-CoA还原酶、TRPV1表达量。四、结果1、三组小鼠成石率分别为对照组(0%)、模型组(100%)和治疗组(20%)。利用偏振光显微镜观察三组小鼠的胆囊,模型组可以看到较多具有明显特征的胆固醇晶体产生,对照组并没有出现。而治疗组仅在小鼠胆囊内偶见散在胆固醇结晶。2、与对照组小鼠相比,模型组小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量均有显著增高,而高密度脂蛋白的含量却有下降。治疗组小鼠与模型组小鼠相比,显著降低的是血清中低密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯的含量。而显著升高的是高密度脂蛋白含量。对比模型组小鼠,治疗组小鼠胆囊病理炎症症状明显减轻。3、相对于对照组,COX-2及MUC5AC在模型组中的表达明显增强,而TRPV1的表达明显降低,治疗组中COX-2及MUC5AC的表达明显降低,而TRPV1的表达明显升高。肝脏组织CYP7A1及TRPV1的表达在模型组中明显降低,而HMG-Co A还原酶的表达明显升高,在治疗组中肝脏组织CYP7A1及TRPV1的表达明显升高,而HMG-CoA还原酶的表达明显降低。五、结论1、本研究中采用高脂致石饲料法成功建立了稳定、高效的C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石模型。2、辣椒碱可通过激活TRPV1,调节肝脏中CYP7A1和HMG-CoA还原酶等胆固醇代谢关键酶的活性,进而干扰小鼠胆囊胆固醇结石的形成过程。并通过影响胆囊中炎症因子COX-2和MUC5AC的表达,改善胆囊炎症病理症状,进而干扰小鼠胆囊胆固醇结石的形成过程。