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太平洋鳕神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus,PCNNV)是太平洋鳕繁育过程中易感染并导致鱼苗大量死亡的主要病毒。本研究从太平洋鳕中克隆获得Fas和FasL基因,对其进行生物信息学分析、原核表达、亚细胞定位以及对EPC细胞系的效应等研究,以期从FasL/Fas信号通路探索PCNNV暴发时太平洋鳕的免疫调节机制,为实现太平洋鳕的人工繁育提供理论依据。太平洋鳕FasL cDNA长1388 bp,5′UTR占315 bp,3′UTR占500 bp,ORF含有573 bp,ORF编码190个氨基酸,预测的编码蛋白含有一个较为保守的TNF家族同源结构域(THD)。构建了pET-32a-FasL原核表达载体,体外获得蛋白分子量约为39 kDa的FasL重组蛋白,蛋白质谱鉴定结果与预期氨基酸序列一致。MTT法检测FasL重组蛋白对EPC细胞系的效应,结果显示,高浓度的FasL重组蛋白可诱导EPC细胞大量死亡。Fas是FasL的受体,太平洋鳕Fas基因cDNA全长1975bp,5′UTR占106 bp,3′UTR占867 bp,ORF含有1002 bp,ORF编码333个氨基酸,预测的编码蛋白含有一个信号肽、一个跨膜区、3个CRD结构域和1个DD结构域。系统进化树分析结果显示,Fas和FasL的进化方向与物种进化的方向一致,且功能结构域的保守性较高。QPCR结果表明,Fas和FasL可在多个组织中表达,且在脾和鳃中的表达量较高;Fas和FasL在太平洋鳕仔鱼发育过程中的表达不同步;PCNNV感染后,Fas基因表达水平会出现显著上调,但高拷贝的病毒会抑制FasL的表达。本研究分别构建了Fas和FasL的真核表达载体GFP-Fas、pDsRed-FasL。亚细胞定位显示,FasL主要定位在细胞质中,Fas主要以星状定位于细胞膜。MTT法检测FasL重组蛋白和Fas过表达对EPC细胞系的协同效应,结果显示,Fas的过表达可提高FasL重组蛋白诱导的细胞死亡率。经qPCR检测发现,Fas的过表达可以显著诱导Fas/FasL信号通路中bcl-2、bax、RIP3、MLKL、PGAM基因的上调,对caspase3、caspase9基因的诱导不显著,FasL的过表达可以显著诱导Fas/FasL信号通路中bax、caspase3、caspase9、RIP3、MLKL基因的上调,但PGAM基因下调。流式细胞术检测结果显示,Fas过表达会诱导EPC细胞发生细胞凋亡和坏死;FasL过表达会导致EPC细胞发生凋亡。该结果与Fas/FasL信号通路相关基因的转录水平相符。