生物学和临床研究发现维生素家族及其类似物在多种肿瘤模型中发挥抗肿瘤作用。维生素家族天然、安全,但发挥抗肿瘤作用时普遍需要高的用药剂量和长的药物处理时间。维生素的联合治疗可以在降低用药剂量的同时,显著提高抗肿瘤效果,是一种非常有潜力的抗癌疗法。本论文探索维生素C（vitamin C）、维生素K2（vitamin K2）及维生素K家族类似物PPM-18三者联合用药抑制膀胱癌细胞增殖效果,并深入解析其机制。主要工作如下:（1）发现较低剂量的vitamin C、PPM-18及vitamin K2联合用药可以诱导膀胱癌细胞死亡。通过正交实验,优化vitamin C、PPM-18及vitamin K2联合用药配比,通过细胞活力检测、细胞形态观察、结晶紫染色和细胞平板克隆实验发现4 m M vitamin C+5μM PPM-18+50μM vitamin K2（以下简称CPK）显著抑制膀胱癌细胞EJ、T24的生长,但对人正常肝细胞L02无明显毒副作用,且对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人肺癌细胞A549、人宫颈癌细胞Hela、人前列腺癌细胞PC3和人神经胶质瘤细胞U87同样具有抗癌效果,具有一定的广谱性。（2）发现非caspase介导的细胞凋亡以及自噬诱导的细胞死亡是CPK诱导膀胱癌细胞死亡的主要方式。通过Annexin V-FITC/PI双染发现CPK诱导膀胱癌细胞凋亡,但Western blot并未检测到caspase 3和PARP的切割片段,且用caspase抑制剂Z-VAD-FMK也不能拯救由CPK诱导的细胞死亡,表明CPK诱导的细胞凋亡是非caspase介导的。另一方面,利用透射电子显微镜观察线粒体结构和自噬小体,发现线粒体肿胀,并有自噬小体的积累,结合Western blot中检测到自噬标志蛋白LC3-II/I比值逐渐升高,p62含量逐渐下降,表明CPK诱导膀胱癌细胞自噬且自噬流顺畅。为进一步探究自噬与细胞死亡之间的关系,采用自噬抑制剂3-MA、CQ、Bafilomycin A1以及自噬激活剂Rapamycin、HBSS饥饿、血清饥饿与CPK共处理,发现3-MA、CQ、Bafilomycin A1可以部分回补由CPK诱导的细胞死亡,而Rapamycin、HBSS饥饿、血清饥饿能加速CPK诱导的细胞死亡,表明CPK通过引起细胞自噬诱导细胞死亡。（3）探究CPK联合用药诱导膀胱癌细胞死亡的机制。通过活性氧（ROS）检测探针DCFH-DA及线粒体ROS检测探针Mito-SOX检测细胞内总ROS和线粒体ROS的水平发现,CPK可以诱导膀胱癌细胞内总ROS水平升高,但对线粒体ROS无显著影响。通过胞外H2O2含量的检测,发现CPK可以在胞外形成氧化还原循环并产生H2O2,提升胞内ROS水平。利用总ROS清除剂NAC与CPK共处理,发现NAC可以完全回补CPK引起的细胞凋亡、自噬和死亡,表明CPK通过上调细胞内ROS水平诱导膀胱癌细胞死亡。通过Western blot检测膀胱癌细胞葡萄糖转运蛋白GLUT1的蛋白表达水平发现,CPK可以上调EJ细胞GLUT1的含量,且葡萄糖可以有效回补由CPK引起的细胞活力下降。因此,推测CPK联合用药的可能机制为:CPK在胞外形成氧化还原循环,将vitamin C氧化为DHA,并产生H2O2,H2O2进入细胞后上调细胞内ROS水平;DHA可以与葡萄糖竞争性结合GLUT1被转运至细胞内,在胞内被谷胱甘肽还原为vitamin C并进一步提升细胞内ROS,造成细胞死亡。综上所述,CPK联合用药通过诱导ROS产生引起膀胱癌细胞凋亡、自噬和死亡,在降低用药剂量的同时显著提高维生素的抗癌活性,为膀胱癌的治疗及维生素的联合用药提供新的策略。