【摘 要】
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目的探讨在体外共培养条件下,人脐带间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制。方法采用Transwell间接共培养体系,实验组上层接种人脐带间充质干细胞(UCMSCs),下层接种肝星状
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目的探讨在体外共培养条件下,人脐带间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制。方法采用Transwell间接共培养体系,实验组上层接种人脐带间充质干细胞(UCMSCs),下层接种肝星状细胞(HSCs-LX-2);对照组仅肝星状细胞单独培养。MTT法测肝星状细胞增殖抑制率;HOECHST染色法,直接观察肝星状细胞增殖抑制情况;流式分析技术检测各组肝星状细胞凋亡情况;ELISA法检测各实验组细胞上清液中TGF-β1蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测各组肝星状细胞中TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表达;Western blot法检测各组肝星状细胞TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白的表达。结果与对照组比较,实验组共培养24、48h,随着时间延长肝星状细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05);HOECHST染色可见实验共培养组肝星状细胞凋亡增多,且48h较24h更明显(P<0.05);流式细胞分析示共培养组肝星状细胞凋亡多于对照组,且48h较24h更明显(P<0.05);上清液中,共培养组TGF-β1较对照组少,随着时间增加,差异更明显(P<0.05)。共培养48h实验组TGF-β1及Smad3mRNA表达低于对照组,而Smad7mRNA表达高于对照组(P<0.05)。共培养24h、48hTGF-β1、Smad3蛋白的表达均低于对照组,Smad7蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论人脐带间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能是通过下调TGF-β1、Smad3,上调Smad7蛋白表达而实现的。
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