表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白,EGFR及其配体是细胞信号传导系统的一部分,EGFR过表达是引起肿瘤细胞增殖的重要因素。研究表明,EGFR突变体普遍存在于很多恶性肿瘤细胞表面,其中最常见的是EGFRvⅢ型（the typeⅢEGFdeletion-mutant receptor）。由于EGFRvⅢ仅表达于多种癌细胞表面,因此,EGFRvⅢ成为癌症治疗的理想靶点。为了研究EGFRvⅢ在治疗癌症方面的功能,本研究将编码EGFR、EGFRvⅢ全长的基因以及编码EGFRvⅢ胞外区（E33Ⅺ、E34Ⅺ）的序列分别克隆入载体并尝试进行原核表达及其纯化,以制备针对EGFRvⅢ的特异性多克隆抗体,为进一步研究奠定基础。主要研究结果如下:本实验利用pET30a构建了pET30a/EGFR、pET30a/EGFRvⅢ、pET30a/E33Ⅺ、pET30a/E34Ⅺ原核表达载体,经DNA测序正确后,在菌液起始浓度OD₆₀₀为0.5,IPTG浓度为1mM,温度为37℃及诱导时间为4h条件下,诱导表达出170kDa、145kDa、19.69kDa和38.94kDa的目的蛋白。随后利用融合蛋白中自带的His标签,进行融合蛋白纯化,证明其正确性,并对诱导表达后的蛋白进行定量。利用合成的耦联血蓝蛋白的针对EGFRvⅢ的PEP3短肽进行动物免疫,制备抗血清。通过柱上纯化的方法从中提取针对EGFRvⅢ的特异性抗体。用诱导表达后的His-EGFR、His-EGFRvⅢ、His-E33融合蛋白进行Western Blot,和利用U251,U87,Hela,293细胞进行免疫组化实验的方法来检验抗体的特异性,并进行了抗体的Westem Blot最优稀释度的实验。