绿脓杆菌是一种广泛存在于空气、水、土壤中的条件致病菌。它能引起动物败血症、菌血症、化脓性肺炎等多种疾病,也会造成人的烧伤感染和脓胸。近年来,由于动物饲养规模的不断扩大,绿脓杆菌原发病发病率明显升高,会造成幼小动物的绿脓杆菌病大幅度爆发。当前对于绿脓杆菌病的治疗主要依赖高剂量、长周期的使用抗生素等化学药品,已发现绿脓杆菌具有广谱耐药性,能够选择的有效抗菌药物较少,增加了临床治疗的难度。因此,研制高效、实用的疫苗,进行方便、安全有效的预防接种将成为防治绿脓杆菌病最有效、最经济的方法。flgE可能是绿脓杆菌鞭毛中除构成鞭毛体的组成蛋白FliC蛋白外还未被认识的毒力因子,有着很强的免疫刺激性,可诱使机体产生强烈的免疫应答。本实验以flgE基因为研究对象,通过PCR技术扩增目的基因,克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建出重组质粒pflgE。将BALB/c小鼠分为7组,分别为DNA疫苗组、DNA疫苗菊粉灌胃组、DNA疫苗菊粉做佐剂组、油乳剂灭活疫苗、油乳剂鞭毛蛋白疫苗、pcDNA3.1(+)空载体组和PBS阴性对照组。每两周免疫一次,共免疫三次。称取小鼠的摄食量和体重,计算食物转化率,用间接ELISA法检测血清抗体水平,MTT法检测淋巴细胞增殖情况,试剂盒法检测IFN-γ分泌水平,对小鼠进行攻毒,计算各组小鼠存活数和保护率。对最佳免疫效果的DNA疫苗,以不同的剂量对小鼠进行免疫,检测免疫鼠血清抗体水平,同时进行淋巴细胞增殖试验检测疫苗诱导的细胞免疫应答水平,并且计算每组的保护率,确定最佳免疫剂量。试验结果表明,DNA疫苗具有免疫作用,但免疫效果不如灭活疫苗和鞭毛蛋白疫苗。DNA疫苗中DNA疫苗菊粉做佐剂组免疫效果最好,最佳免疫剂量为20%。本文研究的关于flgE基因的DNA疫苗可以为绿脓杆菌疫苗的后续研究奠定一定的基础。