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背景:三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)因缺乏针对性的靶向治疗药物,预后差,已成为乳腺癌治疗的重要挑战。新辅助化疗的临床研究结果表明,单药顺铂(Cisplatin,CDDP)便能取得较高的病理完全缓解率,但其副作用较大。另有研究表明传统戒酒药双硫仑(Disulfiram,DSF)具有抗肿瘤作用,能有效抑制多种肿瘤细胞的生长,并能增加传统化疗药物的化疗敏感性,显示其与传统化疗药物联合应用的前瞻性意义,而目前尚缺乏DSF与CDDP联合应用治疗TNBC的相关实验研究。纳米药物所具有的靶向性输送和控制释放等方面的优势为其进一步增强体内抗肿瘤效果,降低化疗药物的毒副作用提供了又一思路。在正常组织中的微血管内皮结构完整,血管间隙比较致密,大分子和纳米颗粒不易透过血管壁。而实体肿瘤组织中,新生的肿瘤血管结构完整性差,血管壁间隙较宽,肿瘤区域缺乏滤除颗粒的淋巴回流系统。纳米载药胶束利用肿瘤组织部位的这些特点,被动靶向聚集在肿瘤部位,而不能在正常组织中聚集,从而提高药物在肿瘤处的分布,从而显示出其靶向释放作用,明显降低药物的毒副作用,成为研究热点和药物开发的新方向,而目前尚缺乏纳米胶束载药DSF联合纳米胶束载药CDDP的研究。目的:通过体内及体外实验,观察DSF和CDDP单独应用及联合应用、以及DSF和CDDP的纳米载药胶束单独应用及联合应用对TNBC细胞系MDA-MB-231的生长抑制影响,并初步分析探讨其可能机制。方法:1.MTT法检测DSF、CDDP及其纳米载药胶束单独及联合应用在不同药物浓度比情况下作用于MDA-MB-231细胞72 h后的生长抑制作用。流式细胞仪分别检测DSF、CDDP及其纳米载药胶束单独及联合应用作用于MDA-MB-231细胞24 h后凋亡细胞变化。2.建立TNBC细胞系MDA-MB-231的BALB/c裸鼠移植瘤模型,当肿瘤体积达到50mm3时,将裸鼠称重并随机分为5组,每组6只,分别为PBS组(即对照组),CDDP组,CDDP载药胶束(PLG-Pt)组,DSF载药胶束(L-DSF)组,PLG-Pt﹠L-DSF组,给药剂量:CDDP为5 mg/kg,DSF为15 mg/kg,分别于第0、2、4、7、9、11天尾静脉注射给药,定时间测量裸鼠体重及肿瘤大小。3.应用流式细胞仪检测DSF、CDDP及其纳米载药胶束单独及联合应用作用于MDA-MB-231细胞3 h后的细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平含量变化。电感耦合等离子体质谱仪分别检测DSF、CDDP及其纳米载药胶束单独及联合应用作用于MDA-MB-231细胞4 h、24 h后的细胞内铂含量的变化。结果:1.DSF与CDDP联合应用作用于MDA-MB-231细胞72 h可明显增强CDDP的抗肿瘤细胞增殖效应,在达到相同抑制效果时,CDDP的应用剂量大大降低。单独应用CDDP作用于细胞后半数抑制浓度为32.012μM,DSF与CDDP以摩尔比4:60的比例联合应用后,半数抑制浓度降至16.901μM;作用于MDA-MB-231细胞24h后,CDDP和DSF均可引起凋亡的发生,细胞凋亡数分别为28.2%和21.6%,当CDDP与DSF联合应用时,凋亡细胞数增至52.6%,P<0.001。DSF和CDDP载药胶束联合应用同样表现出类似明显的抑制效应。2.体内试验显示,空白对照组小鼠肿瘤体积在第21天达到297.14±18.85 mm3,而治疗组均表现出明显的肿瘤抑制效果,P<0.001。CDDP组虽表现出较强的抑瘤效果,但产生了严重的毒副作用造成不可逆的体重下降,给药3次后停止治疗,而停药后这一损伤无法逆转,停药后的5天内小鼠相继死亡。CDDP载药胶束组在载有相同剂量的CDDP情况下也可表现出明显的抑瘤效果,肿瘤体积为115.31±4.50 mm3,但体重未出现明显的下降,生存期得到明显延长,直至实验结束小鼠仍存活。CDDP载药胶束与DSF载药胶束联合应用后取得了更加明显的抑瘤效果,肿瘤体积为67.30±17.60 mm3优于任何一个单独治疗组,P<0.05。3.微量的DSF与CDDP联合应用后,与单独应用CDDP相比,能明显增加细胞内ROS含量,P<0.05。电感耦合等离子体质谱仪结果显示,作用于MDA-MB-231细胞24 h后,CDDP组细胞内铂的含量为(22.062±1.229)ng Pt/106 cells,而DSF&CDDP组细胞内铂的含量为(28.607±1.380)ng Pt/106 cells,二者有明显统计学差异,P<0.01。一定时间内,DSF载药胶束和CDDP载药胶束联合应用时,细胞内ROS含量及铂内吞量均明显增加,与小分子药联合应用时机制类似。结论:1.DSF与CDDP联合应用能明显抑制TNBC细胞系MDA-MB-231的增殖。2.CDDP纳米载药胶束同样能有效抑制裸鼠体内肿瘤的生长,但毒性较CDDP明显降低,延长了裸鼠的生存期。3.CDDP载药胶束与DSF载药胶束均有明显的抑瘤效果,当二者联合应用后,抑瘤效果进一步增强。