万寿菊再生和遗传转化体系的建立及重要性状的遗传分析

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万寿菊(Tagetes erecta)是菊科(Asteraceae)万寿菊属(Tagetes)一年生草本植物,具有重要的观赏、药用和工业价值。杂交育种是万寿菊最主要的育种方法,费时费力。定向快速的基因工程育种成为万寿菊育种的发展趋势。本研究优化了万寿菊的再生体系,并以GUS报告基因,初步建立了万寿菊农杆菌介导的遗传转化体系;同时利用4个万寿菊自交系构建了两个杂交组合(MB×GFR和9906×F8)的六世代群体(P1、P2、F1、F2、BCP1、BCP2),通过对万寿菊各数量性状在分离世代中进行遗传分析,为目标性状选择育种、性状改良提供理论依据和方向。主要研究成果如下:(1)万寿菊再生体系优化以40个不同基因型的万寿菊小叶和复叶为外植体,在特定条件下诱导分化不定芽,筛选最佳再生基因型和外植体类型为‘里程碑·黄色’的全小叶;最佳再生培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+0.5 mg/L IBA+8 g/L 琼脂+40 g/L蔗糖,再生率达70%,玻璃化率降低到16%;再生过程中不进行暗培效果更好;最佳伸长培养基为:MS+-8 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,伸长率为91.3%。(2)万寿菊遗传转化体系初探以万寿菊‘里程碑·黄色’的全小叶为外植体,根据GUS基因瞬时表达和愈伤组织时期的稳定表达情况,初步建立了农杆菌介导的遗传转化体系。结果显示,最佳转化条件为:菌株EHA105,菌液浓度OD600=0.4,预培养0d,侵染10 min,共培养2d,共培养基添加AS浓度为100 μmol/L,筛选培养基中添加抗生素Km 10 mg/L,Cef 100 mg/L。(3)万寿菊重要数量性状遗传分析通过对万寿菊两个杂交组合(MB×GFR和9906×F8)的六世代群体(P1、P2、F1、F2、BCP1、BCP2)的9个重要数量性状进行测量,分析其在杂交后代中的遗传力、表型分布和相关性。遗传力分析表明,各性状遗传主要受加性效应控制,广义遗传力和狭义遗传力都较高,在育种工作中适合进行早期选择。表型分布表明,9个性状在两组合各分离世代都存在超亲分离现象。相关性分析表明,株高与株幅、分枝数具有很强的正相关性;花朵数与分枝数呈极显著正相关,与株高、株幅呈显著正相关,与花序直径、花序高度和花梗长呈一定程度负相关;花序直径与花序高度、花梗长呈显著正相关。本研究通过建立万寿菊再生和遗传转化体系及对重要数量性状进行遗传分析,从生物技术育种和遗传选择育种两方面推进万寿菊育种进程,为万寿菊性状改良、新品种培育奠定坚实的基础。
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