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膜联蛋白1(Anxa1)是一种钙依赖的磷脂结合蛋白,在动物、植物、微生物中均有表达,参与多种细胞生理活动。由于小鼠背部皮肤组织中Anxa1基因的表达随着毛囊生长周期的变化而变化,我们推测Anxa1可能是影响毛囊生长发育的关键因子。为了探究Anxa1基因对小鼠毛囊生长发育的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术体系结合显微注射技术制备Anxa1基因的敲除(knockout,KO)和过表达(overexpression,OE)小鼠;通过脱毛诱导实验比较小鼠背部毛发生长的速度;通过组织切片的显微观察统计小鼠背部皮肤组织中毛囊的密度和直径;通过纤维细度仪测量小鼠毛干的直径。通过免疫荧光染色检测小鼠毛囊中Ki-67、CD34的分布;通过qRT-PCR或Western Blot检测小鼠背部皮肤组织中Egf、Notch1、Mkk7的表达水平;通过Western Blot检测小鼠背部皮肤中Akt1、Erk1/2的磷酸化水平。本研究利用CRISPR/Cas9技术体系结合显微注射技术制备Anxa1 KO与OE小鼠,获得4只KO小鼠和5只OE小鼠,阳性率分别为为19.0%和20.8%。10周龄小鼠脱毛诱导13天后,发现KO小鼠背部已经长出浓密的毛发,未经遗传修饰的原生型(WT)小鼠和OE小鼠背部毛发较短。10周龄KO小鼠的毛囊数量(33.6±0.5)略多于WT小鼠(33±1.2),OE小鼠的毛囊数量(27±0.7)少于WT小鼠(33±1.2)(P<0.05)。P70鼠龄KO小鼠背部皮肤组织中毛囊的直径(43.28±2.27μm)大于WT小鼠(35.76±2.11μm)(P<0.05),OE小鼠背部皮肤组织中毛囊的直径(33.35±2.17μm)小于WT小鼠(35.76±2.11μm)。KO、OE和WT小鼠的毛干直径分别为21.12±1.18μm、19.24±1.87μm、19.92±1.32μm,KO小鼠背部的毛干直径大于WT小鼠(P<0.05),OE小鼠背部的毛干直径小于WT小鼠。P35鼠龄KO、OE小鼠与WT小鼠的毛囊直径分别为92.29±3.22μm、73.71±2.92μm、80.57±1.36μm,KO小鼠的毛囊直径大于WT小鼠(P<0.05),OE小鼠毛囊的直径小于WT小鼠。在P35鼠龄小鼠中,KO小鼠的整个毛囊中都有Ki-67、CD34蛋白的聚集,而在OE和WT小鼠中Ki-67、CD34蛋白主要聚集在毛囊的内根鞘和外根鞘中。在P70鼠龄小鼠中,Ki-67、CD34蛋白在KO、OE和WT小鼠毛囊中的聚集都很低。在P35鼠龄小鼠的背部皮肤组织中,KO小鼠的Egf、Notch1、Mkk7 mRNA的相对表达量高于WT小鼠,分别是其2.15倍、19倍(P<0.05)、2.78倍(P<0.05);OE小鼠的Egf、Notch1、Mkk7mRNA的相对表达量低于WT小鼠,分别是其0.36倍(P<0.05)、0.28倍、0.48倍。在P70鼠龄小鼠背部皮肤组织中,KO小鼠的Egf、Notch1、Mkk7 mRNA的相对表达量高于WT小鼠,分别是其3.09倍(P<0.05)、3.98倍、1.47倍,OE小鼠的Egf、Notch1、Mkk7 mRNA的相对表达量低于WT小鼠,分别是其0.16倍(P<0.05)、0.40倍、0.57倍。KO小鼠的Akt1、Erk1/2蛋白磷酸化水平高于WT小鼠,是其2.67倍(P<0.05)、1.78倍(P<0.05);OE小鼠的Akt1、Erk1/2磷酸化水平低于WT小鼠,是其0.69倍、0.8倍。