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戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)属于戊型肝炎病毒科(Hepevirdae)正戊肝病毒属(Orthohepevirus),是单股、正链、无包膜的RNA病毒。戊型肝炎病毒粒子为正二十面体,直径约为27-35nm,基因组全长约为7.2kb,通常包括三个部分重叠的开放阅读框(Open reading frames,ORFs),分别为与病毒RNA复制有关的ORF1、编码病毒衣壳蛋白的ORF2和与病毒复制和组装有关的ORF3。由HEV引起的人戊型肝炎(HE)在亚洲、非洲、美洲、欧洲等地区均有暴发流行。除此之外,HEV及其类似病毒已经在野猪、家养猪、雪貂、水貂、狐狸、兔、蝙蝠、鼠、狐狸、禽等多种动物中检测到,说明这类病毒能够在多种动物宿主中传播。2014-2015年,我们对云南省的啮齿动物肝炎病毒流行情况进行调查,发现该地区啮齿动物携带与HEV相似的病毒,并在丽江高山姬鼠(Apodemuschevrieri)和泸西县黑腹绒鼠(Eothenomys melanogaster)体内发现两类新型HEV,分别命名为丽江戊肝病毒(LiJiang hepatitis E virus,LJ-HEV)和泸西戊肝病毒(Luxi hepatitisE virus,LX-HEV)。本研究对云南地区HEV流行情况及对LJ-HEV和LX-HEV进行了遗传进化等方面进行研究,主要结果如下: 我们对来自我国云南省的3科4属7种共计278份啮齿动物肝组织样品进行了RT-PCR检测,获得了67份HEV阳性样品,阳性率为24.1%,其中1份阳性样品来自中华绒鼠(Eothenomys chinensis),6份阳性样品来自黑腹绒鼠(Eothenomys melanogaster),其余60份阳性样品来自高山姬鼠(Apodemuschevrieri)。对RdRp部分序列(240bp)比对发现这些阳性序列之间的相似性为63-99%,存在较大遗传多样性;与已报道的病毒序列相似性为74-89%,可能存在新型戊型肝炎病毒。进一步分析显示,中华绒鼠HEV与雪貂HEV亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸相似性分别为75%和81%;与黑腹绒鼠HEV和高山姬鼠HEV亲缘关系最近的均是鼠HEV,前者与鼠HEV核苷酸和氨基酸相似性分别为73-78%和67-71%,后者分别为74-89%和91-100%。 获得两类(LJ-HEV,LX-HEV)共计四条新型HEV全基因组序列:LJ-14、LJ-86、LX-40、LX-67,长度分别为6982bp、6980bp、6974bp、6977bp。该四株病毒具有戊肝病毒科的典型3个ORF(ORF1,ORF2,ORF3),其中LJ14和J86还具鼠HEV特有的ORF4。比对发现LJ-HEV同源性最高的为鼠HEV LA-B350,相似性为65%,LX-HEV也与鼠HEV LA-B350序列同源性最高但相似性仅54-55%,表明LX-HEV与已知的HEV差异性更大,可能为新型HEV。针对HEV的不同ORF比对结果与全基因组比对分析结果一致,均显示了与目前已知HEV序列存在巨大差异。遗传距离(P-distance)结果显示,LJ-HEV属C型戊肝病毒,LX-HEV为新型戊肝病毒。 为了进一步开展动物中新型戊型肝炎病毒血清流行病学调查,我们选择LJ14编码衣壳蛋白的ORF2进行了原核表达,结果显示全长ORF2蛋白形成包涵体可溶性较低。去除疏水区后的ORF2截短蛋白为可溶性蛋白,本研究成功纯化了该截短蛋白,并免疫兔制备了效价约128,000的多克隆抗体,初步ELISA实验从73份鼠血清检测到9份阳性样本,抗体阳性率为12.3%。