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目的:1、探究角膜碱烧伤后是否存在Wnt/β-catenin信号通路的激活;2、研究米诺环素抑制大鼠角膜碱烧伤炎症反应的机制是否与Wnt/β-catenin信号通路有关。方法:选取SPF级健康雌性SD大鼠120只,从中随机选取24只作为正常对照组,将其余大鼠的右眼建立角膜III级碱烧伤模型后随机分为4组,每组24只(24眼),分别为:溶剂对照组、米诺环素组、氯化锂(激动剂)组、联合处理(米诺环素+氯化锂)组。正常对照组不作任何处理。溶剂对照组、米诺环素组、氯化锂组、联合处理组分别予以0.9%Na Cl溶液(10ml/Kg,qd)、米诺环素溶液(45mg/kg,bid)、氯化锂溶液(45mg/kg,qd)、米诺环素溶液(45mg/kg,bid)+氯化锂溶液(45mg/kg,qd)行腹腔注射。于碱烧伤后第1、4、7、14天分别从各组中随机选取6只大鼠,用裂隙灯观察各组大鼠眼前段情况并行角膜荧光染色、拍照,评估角膜炎症指数、角膜上皮愈合率,随即处死大鼠并摘除右眼眼球。制作角膜组织病理切片,行HE染色并用免疫组织化学染色法检测角膜组织中TCF4的阳性率。RT-PCR法检测角膜组织中GSK-3β、β-catenin、TCF4、IL-1β、TNF-αm RNA的相对表达量。结果:1、溶剂对照组角膜碱烧伤后炎症反应、上皮愈合情况及Wnt/β-catenin信号通路的变化1)正常对照组大鼠全程角膜透明,无充血及炎症反应,角膜上皮无缺损,角膜荧光染色阴性。溶剂对照组在碱烧伤后第1、4、7天炎症指数逐渐上调,第14天炎症指数下调,各时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。溶剂对照组在碱烧伤后第1、4、7、14天角膜上皮愈合率逐渐增加,各时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。2)免疫组化显示,正常大鼠角膜TCF4呈低表达或未见明显表达。溶剂对照组在碱烧伤后TCF4呈高表达,并在第1、4、7天表达逐渐上调,第14天表达下调,各时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。3)RT-PCR显示,与正常对照组相比,溶剂对照组在碱烧伤后GSK-3βm RNA呈低表达且在第1、4、7天表达逐渐下调,第14天表达上调,β-catenin、TCF4、IL-1β、TNF-αm RNA呈高表达,并在第1、4、7天表达逐渐上调,第14天表达下调,各时间点溶剂对照组与正常对照组相比以及溶剂对照组不同时间点相比差异均有统计学意义(P<0.05)。2、角膜碱烧伤经米诺环素及氯化锂处理后炎症反应及角膜上皮愈合情况1)与溶剂对照组相比,角膜碱烧伤加用米诺环素后各时间点炎症指数下调,加用氯化锂后炎症指数上调,各时间点组间比较,除联合处理组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,其他各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。2)与溶剂对照组相比,角膜碱烧伤后第1、4、7天,加用米诺环素后角膜上皮愈合率增加,加用氯化锂后角膜上皮愈合率下降,各时间点组间比较,除联合处理组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,其他各组间差异均有统计学意义(P<0.05),角膜碱烧伤后第14天,加用米诺环素组角膜上皮愈合率增加,与其他三组相比差异有统计学意义(P<0.05),氯化锂组、溶剂对照组与联合处理组两两相比无统计学差异(P>0.05)。3、角膜碱烧伤经米诺环素及氯化锂处理后炎症因子和Wnt/β-catenin信号通路相关指标的变化1)免疫组化显示,与溶剂对照组相比,角膜碱烧伤加用米诺环素后TCF4的表达量下调,加用氯化锂后TCF4的表达量上调,各时间点组间比较,除联合处理组与溶剂对照组相比无显著差异(P>0.05)外,其他各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。2)RT-PCR显示,与溶剂对照组相比,碱烧伤后第1、4、7、14天加用米诺环素后GSK-3βm RNA表达上调,β-catenin、TCF-4、IL-1β、TNF-αm RNA表达下调,加用氯化锂后GSK-3βm RNA表达下调,β-catenin、TCF-4、IL-1β、TNF-αm RNA表达上调,各时间点除联合处理组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1、Wnt/β-catenin信号通路可能参与角膜碱烧伤后炎症反应过程。2、Wnt/β-catenin信号通路过度激活可能加重角膜碱烧伤炎症反应,延缓角膜上皮愈合。米诺环素可能通过激活GSK-3β从而调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制角膜碱烧伤后的炎症反应,促进角膜上皮愈合。