结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。目前,对于CRC的临床治疗手段仍局限于手术切除、放疗和化疗。近年来,免疫治疗尤其是以新抗原(neoantigen)为靶点的免疫治疗在癌症治疗中备受关注。新抗原是一种肿瘤特异性抗原,由肿瘤细胞的基因突变产生,在正常细胞中无表达。与自身性抗原不同,新抗原作为一种“非我”的抗原被机体免疫系统识别,进而激发免疫系统产生特异性、高效且安全的免疫应答。较多的研究表明,靶向新抗原的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)是杀伤肿瘤细胞的主要T细胞群体。然而,正常情况下,由于新抗原在癌细胞中的表达水平较低或是抗原提呈效率较低,所以病人体内靶向新抗原的特异性CTLs数量很少。因此,通过设计以新抗原为靶点的癌症疫苗来增强机体对新抗原的免疫应答是很有必要的。本研究首先通过融合PCR将新抗原Adpgk编码基因插入到截短型乙肝病毒核心抗原(HBcAg)(1-149aa)第78、79位氨基酸编码序列之间,并将融合基因克隆至原核表达载体pET-22b(+)中。利用大肠杆菌表达系统对融合蛋白进行表达。经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE与Western-blot检测融合蛋白的表达情况。SDS-PAGE结果显示,在插入位点C端引入RD序列后,融合蛋白HBc-RD-Adpgk的可溶性表达;未引入RD序列的融合蛋白HBc-Adpgk为难溶性表达。说明RD序列可以改变HBc-Adpgk的理化性质,提高其溶解度。诱导表达后的目的蛋白利用亲和层析与超滤法对目的蛋白进行纯化。透射电镜观察结果显示,HBc-RDAdpgk蛋白可以正确组装成直径约为30nm的病毒样颗粒,说明新抗原Adpgk与RD序列插入HBcAg后未改变其自组装特性。本研究成功制备重组新抗原Adpgk的HBcAg VLP,为靶向新抗原的重组VLP癌症疫苗研究奠定基础。为了提高HBcAg重组新抗原的数量以增加疫苗的治疗靶点,本研究将新抗原Adpgk,Reps1与Dpagt1的编码基因串联插入至截短型HBcAg第78、79位氨基酸编码序列之间并在插入位点两侧辅以柔性氨基酸序列,对全长基因序列进行密码子优化后,全基因合成HBc-neoantigens并将其克隆至原核表达载体pET-22b(+)中。利用大肠杆菌表达系统对融合蛋白进行表达。对诱导表达条件进行优化并通过SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况。结果显示,目的蛋白于0.1m M IPTG37℃、30℃与16℃诱导条件下均为包涵体表达。本研究为重组多表位的VLP癌症疫苗研究奠定了基础。