抗草甘膦转基因玉米的研究

来源 :山西大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:li_heping1986
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玉米(Zea mays L.)作为世界三大粮食作物之一,是重要的粮食作物、饲料以及工业加工原料。而杂草是玉米减产的主要危害之一,在玉米生长过程中会争夺水分,养分和阳光,并且引起病虫害的发生。因而研究如何有效经济的控制玉米田间杂草具有重要意义。随着生物技术的发展,利用基因工程的手段获得抗草甘膦作物新品种已成为最理想的手段。自1998年,抗草甘膦转基因玉米品种GA21获得批准商业化种植以来,各种抗草甘膦、抗虫、抗病等优良性状的转基因玉米品种相继推出,转基因玉米是世界上种植面积最广的转基因粮食作物。本研究中利用超声波辅助花粉介导转化法和超声波辅助农杆菌介导萌发种子转化法两种方法将携带目的基因——抗草甘膦基因CP4-EPSPS的载体转入到玉米自交系昌7-2中。其中pM3301UbiSpCP4载体选用了组成型强启动子——玉米泛素启动子pZmUbi-1启动表达,同时该载体携带了叶绿体信号肽(Signal Peptide),有助于目的基因成功定位到叶绿体内,使得CP4基因在玉米叶绿体中更好的表达。另外这两种新型的转基因方法是以花粉和萌发的种子作为受体,避开了组织培养再生植株的过程,且无基因型依赖性,为广大育种工作者提供了简便经济且易于操作的两种种质创新途径。另外玉米自交系昌7-2作为目前生产中广泛使用的优良自交系,农艺性状良好,获得转基因株系后能最快应用于生产。主要研究结果如下:将构建好的载体pM3301UbiSpCP4利用超声波辅助花粉介导的转基因方法对1552株(T0代)玉米进行遗传转化,成功获得了943粒结实种子。对T1代出苗的648个转化株涂抹2%浓度的草甘膦进行田间鉴定筛选,有29株长势健康,表现出抗草甘膦的性状,通过PCR对这些株系进行目的基因检测,其中有16个株系扩增出阳性条带,RT-PCR显示16个阳性株系中外源基因CP4-EPSPS正常转录。同时进行了PCR-Southern blot检测,进一步证明了外源基因CP4-EPSPS稳定遗传到了T1代。T1代的16个株系自交后收获种子(T2代),对T2代部分转基因株系涂抹2%浓度的草甘膦,筛选出了5个抗性良好的转基因株系Anti-3,11,12,23,29。经PCR、Southern、ELISA检测结合田间抗草甘膦筛选试验,最终获得了3个高抗草甘膦、单拷贝且抗除草剂蛋白表达量较高的转基因玉米株系Anti-3,23,29。本研究为抗除草剂转基因玉米的研究奠定了基础,并为育种工作提供有价值的新种质。
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