毛囊是皮肤的一部分,由间充质和上皮组织组成。毛囊中有一群特殊的间充质细胞,称为毛乳头（DP）细胞,移植的DP细胞可以与表皮细胞相互作用从而诱导小鼠毛囊的重建。但是,DP细胞在体外会随着传代培养而快速丢失诱导毛发再生的能力。本论文拟探究成球培养条件下小鼠真皮成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的可能性,为毛囊组织工程寻找新的DP细胞来源。主要研究内容如下:1)通过改良的显微解剖加酶消化法从小鼠触须部分分离得到毛乳头,将毛乳头进行体外培养,利用q RT-PCR,碱性磷酸酶染色和细胞免疫荧光染色的方法从基因水平和蛋白水平鉴定所提取的细胞是否为毛乳头细胞,同时验证体外传代培养下毛乳头细胞是否丢失其诱导毛发新生活性。2)在96孔板上涂覆软琼脂糖膜制备低黏附表面,采用倾斜培养的方法诱导小鼠真皮成纤维细胞聚集成球;通过改变每孔加入的细胞数量调控所形成的细胞聚集体的大小。探究小鼠真皮成纤维细胞成球培养以及所形成的聚集体的大小对真皮成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的影响。3)构建碱性磷酸酶（ALP）启动子驱动的报告基因载体,探究报告基因系统是否能表征二维培养和成球培养条件下小鼠真皮成纤维细胞中ALP的动态表达。本论文验证了本实验室提取获得的真皮细胞为小鼠毛乳头细胞,并且小鼠毛乳头细胞体外传代培养后其毛乳头特异标记物的表达迅速下降,丢失其毛发诱导特性。琼脂糖膜低粘附表面能诱导小鼠真皮成纤维细胞形成细胞聚集体,并且成球培养能诱导小鼠真皮成纤维细胞中毛乳头特异性标记基因上调,然而细胞聚集体的大小对其影响不明显。构建的ALP启动子驱动的报告基因载体能够反映出细胞中ALP的表达变化,为成球培养下小鼠真皮成纤维细胞向毛乳头样细胞转化的研究提供了一个更加直观、简便、可靠的监测方法。