瞬时受体电位(TRP)阳离子通道作为细胞传感器让人和动物感应到化学、机械力、光以及温度的变化。他们对于离子体内平衡和新陈代谢同样重要。TRP和TRP基因的突变与人和动物疾病密切相关。TRP家族包括6个亚族:TRPA、TRPC、TRPM、TRPML、TRPP 及 TRPV。TRPV 亚族包括 6 个成员,TRPV1 到 TRPV6。TRPV6 基因在蛋鸡十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠及肾,蛋壳腺中均有表达,其中在十二指肠表达量显著高于其他组织。提示TRPV6可能在小肠钙跨细胞转运过程中起重要作用。目的:Ca2+体内平衡对骨稳态的维持起着重要作用,TRPV6作为钙离子选择性通道,是Ca2+转运的限速步骤。但是,TRPV6在蛋鸡体内的调节机制还不清楚,本文旨在研究体内沉默TRPV6对钙转运相关基因的影响,从而阐明TRPV6在蛋鸡体内的调节机制。方法:重组质粒pSIREN-TRPV6-3由本实验室保存,通过转化,酶切和测序鉴定确定阳性克隆。为探明重组质粒的转染效果,在体内转染后,提取十二指肠和空肠DNA,应用PCR技术对重组质粒ZsGreen序列进行扩增,同时应用Real-time PCR和Western-blot的方法检测TRPV6定量表达变化,以及钙转运相关基因的定量表达变化。同时,测定试验组蛋鸡血钙、血磷、PTH以及股骨、胫骨骨放射密度。结果:酶切和测序结果显示,重组质粒pSIREN-TRPV6-3构建成功,可进行体内试验。PCR扩增结果显示,重组质粒成功在十二指肠和空肠转染并表达,Real-time PCR和Western-blot结果表明,与对照组比较,试验组在7 d、14 d及21 d TRPV6表达水平显著降低(P<0.05),其中转染后14 d降低水平最显著(P<0.01);并且calbindin-D28K表达水平与TRPV6相似,7d、14 d及21 d TRPV6表达水平显著降低(P<0.05),其中转染后14 d降低水平最显著(P<0.01);PMCA1b、NCX1表达未发生改变。血浆中钙磷浓度未发生变化,血浆PTH浓度在转染后7 d、14 d及21 d显著升高(P<0.05),其中14 d和21 d升高最为显著(P<0.01)。与对照组比较,试验组股骨和胫骨骨放射密度降低,但不显著。结论:重组质粒pSIREN-TRPV6-3成功在十二指肠和空肠转染;在十二指肠和空肠中TRPV6仅调节calbindin-D28K的表达,而对PMCA1b、NCX1表达没有影响,在正常钙含量日粮条件下,沉默TRPV6对骨代谢有一定影响,但不是主要影响因素。