十倍体长穗偃麦草衍生后代的筛选和原位杂交鉴定

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十倍体长穗偃麦(Th.ponticum,2n=10x=70,StStStStEeEeEbEbExEx或JJJJJJJSJSJSJS)具有耐旱、抗寒、耐盐碱、抗多种小麦病害等优良性状,是小麦遗传改良中应用最为广泛的近缘物种之一。本实验室利用长穗偃麦草与普通小麦杂交,创制了一批性状各异、特点突出的小偃麦种质系。本研究在前期工作的基础上,通过田间表型鉴定和白粉病抗性评价,在十倍体长穗偃麦草衍生后代中筛选了25份小偃麦种质,明确了其主要农艺性状特点;以十倍体长穗偃麦草基因组DNA作探针、以烟农15基因组DNA作封阻进行基因组原位杂交(GISH)鉴定,进一步进行荧光原位杂交(FISH)鉴定,确定了其中10份小偃麦染色体组成和结构变异特点,为其进一步研究和应用奠定了基础。主要获得了以下结果:1.白粉病抗性鉴定。苗期利用白粉菌E20接种,B18305-6、B18526-5-1、B18526-8-2、B18526-8-4表现近免疫,B18526-9-1、B18526-16-1、B18526-28-2、B18526-29-2表现高抗,B18307-6和B18526-20-2表现中抗。在成株期,上述10份小偃麦种质对白粉病均表现近免疫。其普通小麦亲本在苗期和成株期均为感病,而长穗偃麦草均表现免疫,据此推测小偃麦种质的白粉病抗性源于长穗偃麦草。2.异附加系的原位杂交鉴定。GISH鉴定结果表明,B18307-6为小偃麦双体异附加系。进一步利用基于复合寡核苷酸探针套[AFA-3、AFA-4、pAs1-1、pAs1-3、pAs1-4、pAs1-6、pSc119.2-1、(GAA)10]的FISH鉴定,并与其亲本山农TE20、山农637染色体进行比对,发现B18307-6的1A染色体长臂中间位置红色信号消失,2A染色体短臂末端及近着丝粒附近红色信号消失,7A、1D等染色体也发生了结构变异。3.异代换系的原位杂交鉴定。GISH鉴定结果表明,B18305-6为小偃麦双体异代换系。进一步利用FISH进行鉴定,发现B18305-6缺少了一对7D染色体;与其亲本山农TE20、山农637染色体比对发现,其2A染色体着丝粒附近绿色信号消失和1D染色体短臂末端红色信号消失,说明在其形成的过程中,发生了染色体结构变异。4.易位系的原位杂交鉴定。原位杂交(GISH/FISH)鉴定结果表明,B18526-8-2和B18526-8-4是T1BL·1BS-Tp易位系(Tp示长穗偃麦草染色体片段);B18526-9-1和B18526-29-2是T3DL·3DS-Tp易位系。通过FISH带型比较,B18526-8-2的1A、2A、5A、6A、7A、1B、2B、3B、6B、7B、1D、2D、5D,B18526-8-4的5A、6A、1B、2B、3B、6B、1D、2D,B18526-9-1的1A、2A、7A、1B、2B、6B、7B、1D、2D,B18526-29-2的1A、2A、6A、7A、1B、2B、6B、7B、5D等染色体均与亲本烟农15存在信号差异,发生了明显的结构变异,并且四个易位系间的染色体结构变异存在差异,因此是为不同的小偃麦易位系。5.渐渗系的原位杂交鉴定。GISH鉴定结果表明,B18526-5-1、B18526-16-1、B18526-20-2、B18526-28-2等19份小偃麦种质是渐渗系。进一步利用FISH技术进行鉴定,发现B18526-5-1的1A、6A、7A、1B、2B、5B、6B、5D,B18526-16-1的1A、2A、6A、7A、2B、6B,B18526-20-2的1A、2A、4A、5A、6A、7A、2B、3B、6B、7B、1D、2D,B18526-28-2的1A、2A、6A、7A、2B、6B等染色体的带型与其亲本相比均发生了变化,说明其在形成过程中发生了丰富的染色体结构变异。此外,B18526-5-1、B18526-16-1、B18526-20-2、B18526-28-2等四个渐渗系之间也存在FISH带型差异,农艺性状不同,因此,它们是不同的小偃麦渐渗系。
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