近来,抗生素的大量使用,导致了许多的隐患难患,如“超级细菌”的诞生。我们迫切的需要找到作为抗生素的绿色替代品的新型药物。牛乳铁蛋白肽是近年来发现的一种新型抗菌肽,仅含有25个氨基酸,但其抗菌活性是乳铁蛋白的400多倍。为了提高其稳定性,本实验在牛乳铁蛋白肽基因(LfcinB)的C端分别融合了红色荧光蛋白基因(mApple)、绿色荧光蛋白基因(EGFP),构建以mApple/EGFP为报告基因的酵母表达载体,并且成功构建了重组质粒pYES2-α-LfcinB-mApple 和 pYES2-α-LfcinB-EGFP,将其转入酿酒酵母细胞中进行分泌表达。利用管碟法,检测表达产物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性;利用激光共聚焦荧光显微镜检测重组细胞内的荧光;利用SDS-PAGE分析目的蛋白的存在。真核表达载体pYES2-α-LfcinB-EGFP电转化到酿酒酵母菌株W303和INVSC1中,均用用含有葡萄糖或者棉子糖的两种SC-U液体培养基,诱导培养重组酿酒酵母菌株W303和菌株INVSC1。经抑菌实验检测后,发现对于菌株W303来说,当用含有葡萄糖的SC-U液体培养基诱导培养时,其分泌表达的重组蛋白活性更强一些,而INVSC1菌株无论是含葡萄糖还是棉子糖的SC-U液体培养基进行培养,其抑菌活性相差无几。而重组酵母W303作为宿主菌分泌表达重组蛋白的抑菌活性普遍高于酿酒酵母菌株INVSC1,且所需诱导时间更短。重组蛋白LfcinB-mApple/LfcinB-EGFP对大肠杆菌DH5α和金黄色葡萄球菌都表现出了明显的抑菌活性,且重组蛋白的分泌对重组酵母细胞的生长未产生不利影响。在实验组重组酵母细胞中均观察到明显荧光,且对照组无荧光出现。但SDS-PAGE检测后,未发现目的蛋白。分析结果原因一是目的蛋白被水解,二是融合蛋白发生多个糖基化位点修饰,由于抗菌肽产量较低,因此难以检测到明显蛋白条带。