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第一部分 基因转染小鼠肺癌细胞系瘤苗的构建和鉴定 目的:构建GM-CSF基因修饰的小鼠肺癌细胞系(LLC和LA795)瘤苗,并鉴定其在肿瘤细胞的表达。方法:RT-PCR法扩增小鼠GM-CSF基因,将目的基因GM-CSF连入pMD18-T载体,并对重组质粒进行扩增与鉴定。以测序正确的重组质粒为模板扩增目的基因,并将其连接到pIRES2-EGFP载体,构建重组GM-CSF-pIRES2-EGFP载体。利用该质粒转染小鼠肺癌细胞系制备肿瘤疫苗,ELISA法检测转染后肺癌细胞GM-CSF蛋白的分泌。结果:(1)经测序证实RT-PCR正确扩增了小鼠GM-CSF基因;(2)经酶切鉴定证实GM-CSF-pIRES2-EGFP重组质粒合成正确(3)重组质粒GM-CSF-pIRES2-EGFP转染获得表达GM-CSF基因的小鼠肺癌细胞;(4)转染后的小鼠肺癌细胞经ELISA法鉴定有相应GM-CSF蛋白表达,表达量适合制备肿瘤疫苗。结论:(1)成功构建表达GM-CSF的重组pIRES2-EGFP质粒;(2)转染后的小鼠肺癌细胞能够表达足够的GM-CSF的蛋白,且功能正常,成功制备小鼠肺癌细胞瘤苗。 第二部分 GM-CSF分泌性全细胞肿瘤疫苗的动物实验及免疫机制研究 目的:探讨表达GM-CSF的小鼠肺癌细胞(自体和同种异体)制备肿瘤疫苗的抗肿瘤作用和机制。方法:(1)分成预防组、治疗组和化疗组。预防组和治疗组分为分泌性自体和同种异体瘤苗组、自体和同种异体瘤苗组、PBS对照组;化疗组分为分泌性自体和同种异体瘤苗+化疗组、单纯化疗组;(2)预防组在预防接种后,接种LLC,观察成瘤时间、成瘤后生存时间、ELISA检测小鼠外周血细胞因子的变化、流式细胞法检测检测外周血细胞亚群、脾细胞杀伤实验、