人参ACE抑制蛋白提取工艺的优化及生物活性研究

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目的:选择研究较少但生物功能强大的人参ACE抑制蛋白,通过色谱分离纯化技术、活性检测技术及分析鉴定技术进行人参ACE抑制蛋白生物特性的研究。通过对人参ACE抑制蛋白的提取、纯化及活性研究,为人参ACE抑制剂方面的研究提供依据。方法:采用不同料液比、不同浸提时间、不同提取次数提取人参总蛋白和人参总皂苷,利用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白含量,用醋酸高氯酸法测定皂苷含量,以蛋白提取率和皂苷提取率为评价指标进行正交实验,优选出最佳人参蛋白和皂苷提取工艺路线。运用一系列色谱柱层析技术对人参ACE抑制蛋白进行分离纯化,结合紫外分光光度法对ACE抑制蛋白进行活性筛选。采用Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Tricine-SDS-PAGE)人参的总蛋白和ACE抑制蛋白进行比较研究,比较二者在蛋白分布上的差异。结果:单因素实验结果表明:料液比、浸提时间、提取次数对人参总蛋白和人参总皂苷的提取率均有影响。正交试验结果表明:当料液比为1:15,浸提时间为12h,提取次数为3次时,人参蛋白提取率最高,人参总皂苷提取率也非常高,人参总蛋白收率可达3.41%,人参总皂苷的提取收率可达3%以上。人参总蛋白经过碱水解后,用一系列色谱层析分离纯化出了人参ACE抑制蛋白。ACE抑制活性实验表明,经过逐级纯化得到的ACE抑制蛋白对ACE具有很高的抑制作用,最高的抑制活性可达到92.5%。电泳分析结果表明,人参的总蛋白的分子量主要分布在60-75KDa和30~35KDa范围内。而人参ACE抑制蛋白的分子量主要分布在10KDa。结论:人参总蛋白的最佳提取工艺为:以蒸馏水溶液为溶剂,料液比为1:15,浸提时间为12h,提取3次,提取温度为4℃。该工艺解决了传统工艺中操作繁琐,周期长,成本高等问题,更加适合于工业化生产。利用色谱分离技术纯化了人参ACE抑制蛋白,并确定其分子量大小为10KDa,最终建立一条快速、简单、高效的纯化工艺路线,为进一步研究人参的ACE方面的机理研究和新药研发打下基础。
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