常染色体显性遗传高度近视眼家系致病基因连锁分析

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【目的】 利用连锁分析法对具有常染色体显性遗传特点的高度近视眼家系进行染色体基因定位,寻找致病基因。 【方法】 实验开始时收集了具有常染色体显性遗传特点的高度近视眼家系四个,分别为:CJH家系(25个成员)、TKH家系(9个成员)、YGM家系(5个成员)、CY家系(17个成员),常规眼部裂隙灯和直接检眼镜检查,睫状肌麻痹后检影验光,IOLMaster检查眼轴长度(屈光介质混浊者用A超测定)确定家系成员是否为高度近视眼。因CJH家系较大并且成员资料齐全,对其进行连锁分析。 采用酚氯法提取所有成员的DNA,紫外分光光度仪测量260nm,280nmDNA分光光度值(OD值),计算DNA含量和纯度;选取与以往报道的高度近视基因位点:MYP2(18p11.31)、MYP3(12q21-23)、MYP4(7q36)及MYP5(17q21-22)相连锁及附近的微卫星标记,进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)对微卫星位点进行PCR扩增,将PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,以证实扩增片段为目的片段,观察扩增效率;通过12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳确定等位基因分型;应用LINKAGE软件(version5.2)中的MLINK进
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