PBDE-209和Cd的联合肝毒性效应及机理研究

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多溴联苯醚和重金属都是水体、大气、土壤中检出率比较高的污染物,二者往往同时存在于环境中,呈现共同暴露的状态。因此,对于二者共同暴露是否会产生更为严重的联合毒性需要引起关注。本文选取了应用广泛的十溴联苯醚(PBDE-209)和毒性较大的重金属镉(Cd)来研究二者共同暴露所产生的联合毒性。采用两种人肝癌细胞系,HepG2细胞和SMMC-7721细胞作为实验材料,研究PBDE-209和Cd共同暴露对肝脏细胞的联合毒性效应。具体研究内容和结论如下:1)首先进行了PBDE-209和Cd对人肝癌细胞系单独暴露实验,并用AB法检测细胞活性。发现两种细胞对PBDE-209在考察浓度范围内无明显浓度依赖性,对Cd有明显浓度依赖性。根据单独暴露实验结果成功筛选了共同暴露浓度。2)探究了PBDE-209和Cd共同暴露对人肝癌细胞系细胞状态、线粒体和细胞膜的毒性效应。观察了共同暴露后细胞形态变化。通过MTT法证明共同暴露极可能造成了线粒体损伤。另外,通过检测LDH证明,在考察的浓度范围内,细胞膜并没有明显损伤,毒性效应并不是通过损伤细胞膜造成的。3)使用JC-1荧光探针检测PBDE-209和Cd共同暴露后人肝癌细胞系的线粒体膜电位变化。结合MTT实验结果,确定PBDE-209和Cd共同暴露会造成人肝癌细胞系线粒体损伤。同时,流式结果显示PBDE-209和Cd共同暴露会引起人肝癌细胞系细胞凋亡。因此,PBDE-209和Cd共同暴露产生的联合毒性是通过线粒体通路引起人肝癌细胞系细胞凋亡造成的。4)使用DCFH-DA探针检测了PBDE-209和Cd共同暴露后人肝癌细胞系细胞ROS水平的变化。实验发现,两种污染物共同暴露会引起人肝癌细胞系细胞ROS水平明显升高,这说明细胞内氧化应激反应加剧。ROS水平变化可能是细胞毒性效应的机制之一,并可能是引起细胞凋亡的原因之一。
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