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由尖孢镰刀菌番茄专化型[Fusarium oxysporum f.sp.licopersici (sacc) snyderet Hansen]引起的番茄枯萎病和贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型Botryosphaeria berengeriana de. Not. f.sp. piricola (Nose)引起的梨轮纹病全国普遍发生。生物防治植物病害能降低农产品表面化学杀菌剂的残留量,保护生态环境和人类健康。我们采集不同地区样本,以两种病原菌为靶标菌,分离、筛选对枯萎病菌或轮纹病菌具有很强拮抗作用的菌株,进行种属鉴定。初步研究拮抗细菌产生的抑菌物质及控病促生作用机制,克隆生防相关基因-几丁质酶基因。同时还研究了拮抗菌株之间互作、微生物-化学物质(杀菌剂、NaHCO3)协同作用与防效之间的相关性。研究结果表明：1、22株拮抗细菌对番茄枯萎病菌具有较强的室内抑制作用,其中菌株PTS-394、H-70、L-1和SJ-280抑制率最高；22株细菌均能分泌蛋白酶；其中菌株C8-8能分泌几丁质酶；有3株细菌能分泌纤维素酶；3株细菌能分泌嗜铁素。盆栽试验结果表明：拮抗细菌PTS-394对番茄枯萎病的防效最高,为77.40%；菌株H-70、L-1和SJ-280对番茄枯萎病的防效均大于60%。对上述四株拮抗细菌进行16s rRNA种属鉴定,均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).2、利用PCR方法从菌株C8-8中克隆到编码几丁质酶的chiA基因。同源性比对发现该基因序列与粘质沙雷氏菌的chiA有97%以上的相似性。酶切后连接到质粒28a中,并转化大肠杆菌DH5α,扩增培养后提取质粒28a(chiA)并转入到表达宿主大肠杆菌DH3中。DH3ChiA菌株在几丁质培养基上能产生透明的水解圈,具有几丁质酶活性,超声波破碎后SDS-PAGE电泳显示为一条相对分子质量约为60KDa的蛋白质,该蛋白具有较强的室内抑菌活性。3、拮抗细菌C8-8的最适培养温度为30℃-35℃、最适培养pH值为7.0-8.0。培养时间、初始接种量对菌株C8-8的生长有明显的影响,培养27h后菌液OD值最高；最佳初始接种量应是被接种培养液体积的0.5-1/300。不同通气量对菌株生长无明显影响。不同培养条件(碳源、氮源、诱导物、温度、时间和pH值)下菌株C8-8产几丁质酶的活力差别较大。N-乙酰氨基葡萄糖能完全抑制菌株C8-8产酶；酵母粉和蛋白胨能使菌株C8-8酶活力明显提高；胶体几丁质能诱导菌株C8-8产酶。培养温度为31℃,pH值为7.3,培养6天时菌株C8-8的酶活最高,为485μg GlcNAc·h-1。4、接种菌株C8-8能诱导番茄植株产生抗性效应,提高植株体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)的酶活性；而且还有利于积累活性氧,进一步激发寄主抗性。采用高效液相色谱HPLC对菌株C8-8代谢产物分析表明：该菌株C8-8在NA培养基中的代谢产物内存在大量的产生GA3,推测可能和促生作用相关,培养2d后产生的GA3为158mg/1,而IAA未测出。在基本培养基中该菌株代谢产物未检测出IAA和GA3。5、拮抗细菌之间存在多种互作关系。当混合的2个菌株之间互作关系是亲和的,其生防效果有所提高,如亲和性菌株组合SJ-280+PTS394对番茄枯萎病的防效为47.1%,明显好于单菌株SJ-280(35.3%)和PTS394(38.7%)的防效。当混合的2个菌株之间互作关系是不亲和的,有的菌株组合生防效果下降,如不亲和性菌株组合C8-8+PTS394的防效为23.5%,明显低于单菌株C8-8(52.8%)和PTS394(38.7%)的防效；有的菌株组合生防效果提高,如不亲和性菌株组合L-1+PTS394的防效为50.0%,明显好于单菌株L-1(29.4%)和PTS394(38.7%)的防效。6、分离样本,获得21株对梨轮纹病菌菌丝生长有较强的拮抗能力的菌株,其中拮抗性能最好的细菌sf 628抑菌圈直径达45mm,抑制率达59.21%。梨果接种试验结果表明：21株拮抗能力较强的细菌中有5株拮抗细菌对梨轮纹病菌引起的病斑扩展抑制率大于50%,其中菌株sf 628抑制率达60.61%。进一步的理化特性和分子鉴定结果表明,菌株sf628为枯草芽孢杆菌枯草亚种。7、常见26种化学药剂对梨轮纹病菌的室内毒力测定结果表明：25%敌力脱能有效抑制梨轮纹病菌菌丝生长,ECso值为0.1522μg/ml。将拮抗细菌sf628与25%敌力脱进行复配,结果表明配比为1：3、1：2、1：1、2：1时增效比均大于1.5,表明有增效作用。其中配比为1：3时对梨轮纹病菌的毒力最强,增效比为2.942。拮抗细菌sf628与25%敌力脱配比为3：1时,增效比为1.071,表明两种单剂复配后有相加作用。8、室内抑菌试验结果表明：生防菌单剂对梨轮纹病菌的防效为75.77-85.41%；与NaHCO3协同作用后防效提高,为83.00-90.23%。以生防菌11为例,梨果试验结果表明：先接种病菌再喷施生防菌时,对梨轮纹病的防效为23.83%；与NaHCO3协同作用后防效提高,为48.16-74.57%。先喷施生防菌再接种病菌时,对梨轮纹病的防效为28.72%；与NaHCO3协同作用后防效明显提高,为51.06-80.91%。