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研究背景:伊立替康(CPT-11)是一种常用化疗药物,通过抑制拓扑异构酶Ⅰ(参与DNA复制)达到杀伤肿瘤的目的。但是在其临床应用中常引起迟发型性腹泻、呕吐、中性粒细胞减少症等不良反应,限制了其在临床的应用。伊立替康在治疗过程中会产生肠道毒性,造成肠黏膜屏障的损伤,进而引起肠道功能降低。伊立替康引起的肠道毒性与其在体内的代谢处置密切相关,特别是其活性代谢产物SN38在肠道内蓄积是导致肠黏膜上皮细胞大量坏死的主要原因之一;同时,伊立替康治疗过程中会引起肠道菌群变化,因此,上皮细胞坏死和肠道微生物紊乱导致肠黏膜屏障损伤,造成肠道炎性浸润,进一步加剧迟发性腹泻。黄芩汤(HQD)是有着近两千年历史的中国古药方,载于张仲景所著的《伤寒论》中,由黄芩、甘草、芍药和大枣组成。研究表明,黄芩汤可通过促进肠道干细胞再生,降低中性粒细胞和巨噬细胞的浸润,达到修复肠上皮细胞的目的,缓解伊立替康引发的迟发性腹泻。在文献报道及前期实验工作基础上,本研究通过构建伊立替康小鼠腹泻模型,借助生物信息学方法,利用16sRNA测序技术,结合免疫组化、ELISA等实验,考察黄芩汤干预前后肠黏膜屏障变化情况,包括肠上皮细胞损伤修复,黏膜层蛋白表达水平调节,肠道菌群改善等,着重从保护肠黏膜屏障的角度,阐明黄芩汤降低肠道毒副作用的机制,为临床使用黄芩汤缓解伊立替康腹泻提供科学依据。目的:通过构建CPT-11小鼠腹泻模型,1.考察黄芩汤干预前后,肠上皮细胞的修复情况;2.考察黄芩汤干预前后,肠黏膜层蛋白表达水平的调节情况;3.考察黄芩汤干预前后,肠道菌群的改善情况;4.从保护肠黏膜屏障的角度,阐明黄芩汤降低肠道毒副作用的机制。方法:1.按比例称取黄芩汤药材(黄芩、甘草、大枣、芍药),用水煎煮过滤,滤液冻干后配置成一定浓度的黄芩汤药液。2.建立伊立替康小鼠腹泻模型。实验动物采用BALB/C雌性小鼠,随机分为四组:正常组(NC),伊立替康组(CPT-11),黄芩汤+伊立替康组(HQD+CPT-11)和黄芩汤组(HQD)。HQD+CPT-11组和HQD组在第0-9天进行黄芩汤灌喂(3g/kg/day),对CPT-11组和HQD+CPT-11组在第4-7天进行CPT-11(150mg/kg/day)腹腔注射。每天观察小鼠体重变化和腹泻情况,在第9天统一处死各组小鼠,收集血液、小肠、粪便进行研究。3.利用PCR-DGGE方法和16S rRNA测序技术,对小鼠粪便菌群进行检测,借助生物信息学手段分析各组间菌群变化情况。4.通过H&E染色技术观察小鼠肠组织损伤变化;使用ELISA方法检测小鼠血清中的细胞因子;选用TUNEL技术检测小鼠肠组织细胞凋亡情况;利用免疫组化染色和免疫荧光技术检测肠黏膜屏障相关指标结果:1.黄芩汤能够减轻腹泻恶性程度,缓解血便发生,改善体重下降情况,有效缓解CPT-11引起的迟发性腹泻等毒副作用。2.黄芩汤能够通过上调肠上皮黏蛋白和紧密连接蛋白的表达,保护肠黏膜上皮间的紧密连接结构,形成菌膜屏障,改善肠黏膜屏障功能,降低因CPT-11诱发的小鼠肠组织损伤。3.黄芩汤对CPT-11导致的小鼠肠道菌群紊乱有明显的调节作用,能够显著降低肠道菌群失调标志物—变形菌门细菌的相对丰度;同时增加乳酸杆菌等益生菌的相对丰度。结论:黄芩汤可通过修复肠上皮细胞,维持肠黏蛋白和紧密连接蛋白表达水平,改善肠道菌群结构,形成菌膜屏障,保护肠黏膜屏障功能,进而减缓伊立替康引起的迟发性腹泻等肠道毒副作用。