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越橘栽培遍及世界各地,超过58个国家都在进行越橘栽培生产。中国是越橘的主要贡献国之一,其栽培面积和产量占全世界的16.3%和4.3%。然而土壤盐、碱、干旱等不良条件严重影响越橘产业的健康可持续发展。研究发现WRKY转录因子在植物的胁迫响应、形态建成以及次生代谢等过程中具有重要的作用。本研究通过生物信息学手段对越橘WRKY转录因子家成员进行发掘筛选,并对其性质和功能进行了预测。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试验初步验证了越橘WRKY(VcWRKY)转录因子在不同组织和不同胁迫处理下的表达模式。得到的主要研究结果如下:
1.本研究通过生物信息学分析,共鉴定出30个WRKY转录因子,根据结构域特点可以分为3大类,其中II类按锌指结构氨基酸排序的差别可下分5个亚类。大部分VcWRKY转录因子结构域高度保守,仅有3个基因的结构域出现了变异。此外在2个VcWRKY转录因子中发现了bZIP结构域。VcWRKY基因的外显子数量在3-11之间,内含子数量在0-7个之间,全部成员不均匀的分布在20条染色体上。
2.在VcWRKY基因家族的启动子中共发现了90种顺式作用元件,包括胁迫响应相关元件、光响应元件、激素响应元件、形态建成相关元件和转录调控相关元件。其中激素响应元件可分为生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、茉莉酸甲酯(Meja)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)响应元件。
3.VcWRKY基因不同组织中的表达情况显示,大部分VcWRKY转录因子在根系和果肉中具有较高的表达量,在叶片、叶芽中的表达量较低。部分WRKY转录因子还表现出在绿果-粉果-蓝果中表达量逐渐升高的趋势。除VcWRKY16外,其余VcWRKY基因均在多个组织内具有不同程度的表达,其中VcWRKY9、10、27在12个组织内的表达量均高于大多数VcWRKY基因。
4.通过分析VcWRKY基因在不同非生物胁迫处理下的表达情况,发现6个VcWRKY基因均表现出对盐胁迫、碱胁迫、盐碱胁迫和干旱胁迫不同程度的响应,但对干旱胁迫的响应程度要相对弱于其他3种胁迫。同时在叶片中的响应强度要大于根系。通过比较,6个基因中VcWRKY25与VcWRKY13在4种胁迫处理中均具有较强的响应。
1.本研究通过生物信息学分析,共鉴定出30个WRKY转录因子,根据结构域特点可以分为3大类,其中II类按锌指结构氨基酸排序的差别可下分5个亚类。大部分VcWRKY转录因子结构域高度保守,仅有3个基因的结构域出现了变异。此外在2个VcWRKY转录因子中发现了bZIP结构域。VcWRKY基因的外显子数量在3-11之间,内含子数量在0-7个之间,全部成员不均匀的分布在20条染色体上。
2.在VcWRKY基因家族的启动子中共发现了90种顺式作用元件,包括胁迫响应相关元件、光响应元件、激素响应元件、形态建成相关元件和转录调控相关元件。其中激素响应元件可分为生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、茉莉酸甲酯(Meja)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)响应元件。
3.VcWRKY基因不同组织中的表达情况显示,大部分VcWRKY转录因子在根系和果肉中具有较高的表达量,在叶片、叶芽中的表达量较低。部分WRKY转录因子还表现出在绿果-粉果-蓝果中表达量逐渐升高的趋势。除VcWRKY16外,其余VcWRKY基因均在多个组织内具有不同程度的表达,其中VcWRKY9、10、27在12个组织内的表达量均高于大多数VcWRKY基因。
4.通过分析VcWRKY基因在不同非生物胁迫处理下的表达情况,发现6个VcWRKY基因均表现出对盐胁迫、碱胁迫、盐碱胁迫和干旱胁迫不同程度的响应,但对干旱胁迫的响应程度要相对弱于其他3种胁迫。同时在叶片中的响应强度要大于根系。通过比较,6个基因中VcWRKY25与VcWRKY13在4种胁迫处理中均具有较强的响应。