转基因动物是现代生物研究的重要材料。然而,获得转基因的动物中都会留有转基因筛选的抗生素和荧光标记基因,因此存在生物安全以及环境安全方而的危害。传统转基因技术的基因片段随机插入,可能会引起受体物种重要基因表达异常,或者导致外源基因的表达沉默。本实验通过phiC31整合酶介导基因的定点整合,Cre/Loxp重组酶系统删除筛选标记基因的方法消除安全隐患,为培育无筛选标记基因的转拟蛛丝蛋白基因2S克隆绵羊奠定基础。主要结果概括如下：1.以pEGFP-N1为骨架载体,成功构建了含有attB序列和两个同向Loxp序列的定点整合可删除筛选标记的真核表达载体pEGFP-N1 - 2S。2.pEGFP-N1-2S质粒在phiC31整合酶mRNA的介导下,共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,建立了定点整合转拟蛛丝蛋白基因2S的绵羊细胞系。3.成功诱导Cre穿膜肽,将定点整合绵羊细胞系中的筛选标记基因切除,建立了定点整合无筛选标记的转拟蛛丝蛋白基因2S绵羊细胞系。