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基因组数据分析发现,鸡球虫具有真菌样Ⅰ型2-MCC途径催化酶的编码基因。抑制或阻断2-MCC途径有可能成为抗球虫药物的新药靶,对开发新型抗球虫药物、建立球虫病防治的新策略具有重要意义。本文在基因组数据分析的基础上,通过克隆和原核表达柔嫩艾美耳球虫2-MCC途径相关酶的基因,并对柔嫩艾美耳球虫中的2-MCC途径关键酶2-甲基柠檬酸合成酶进行了体外酶活力测定和动力学分析,为进一步研究鸡球虫2-MCC途径及其相关酶的功能以及寻找新的药靶和开发新型抗球虫药物奠定了基础。本文的主要工作包括：1.通过RT-PCR的方法,成功克隆获得了编码EtMS. EtACN. EtCS. EtACS的基因的全长ORF序列以及EtMD和EtML编码基因的部分序列,证实了2-MCC途径在鸡球虫中的存在。2.鸡球虫基因组数据生物信息学分析发现,编码EtPrpE的基因序列与编码EtACS基因序列完全一致。根据在部分细菌中已报道的研究结果推测,在鸡球虫中,ACS可能同时具有PrpE功能。3. EtMS. EtACN. EtCS和EtACS分别在大肠杆菌表达系统中成功获得表达,为进一步研究其功能奠定了基础。4.获得了具有活性的重组表达蛋白MBP-EtMS,并对其进行了酶促动力学分析。证实EtMS不仅能利用丙酰辅酶A为底物还能以乙酰辅酶A为底物,进一步说明鸡球虫中的2-MCC途径与细菌中的2-MCC途径类似,可能也具有TCA循环的旁路功能。但其抑制物的筛选和抑制动力学分析有待进一步深入研究。DNA甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferases, DNMTs)催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶环的5号碳原子上加上甲基的共价修饰过程(5-methylcytosine,5-mC)。基因组DNA甲基化作为一种重要的表观遗传修饰系统,在调控基因表达、细胞分化以及其它各种生命过程中起到了非常重要的作用。本研究通过检测4种鸡球虫基因组DNA甲基化水平,还检测了刚地弓形虫、新孢子虫和3种隐孢子基因组DNA甲基化水平。另外,我们还对鸡球虫不同发育阶段的基因组DNA甲基化水平进行了检测。通过DNA甲基转移酶抑制物5-azacytidine处理子孢子和子孢子总蛋白提取物DNA甲基转移酶活性检测来验证鸡球虫体内是否具有有活性的DNA甲基转移酶,同时我们还克隆表达了柔嫩艾美耳球虫DNMT2编码基因,并对其进行了酶活力测定。通过体外培养模型,对DNA甲基化水平与鸡球虫入侵细胞的关系进行了初步研究。本文的主要结论是：1.证实了5-mC在顶复门原虫中广泛存在,但水平较低。2.5-mC水平在鸡球虫不同发育阶段差异显著,子孢子阶段明显高于其它4个阶段,说明基因组DNA甲基化在鸡球虫发育转化中可能发挥着重要作用。3.柔嫩艾美耳球虫子孢子基因组DNA甲基化水平能被DNA甲基转移酶抑制物5-azacytidine抑制,而且在柔嫩艾美耳球虫子孢子总蛋白提取物中能检测到DNA甲基转移酶样活性,说明鸡球虫体内存在可能的DNA甲基转移酶样机制。4. EtDNMT2可能不具有DNA甲基转移酶活性。5.体外试验证实了抑制子孢子基因组DNA甲基化水平能促进其入侵细胞。