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本论文工作利用经典分子生物学手段从东亚钳蝎毒腺中成功地克隆得到了3个电压门控钠通道调制剂及1个钙激活钾通道配体的cDNA或Genomic DNA，并对东亚钳蝎神经钠通道的cDNA克隆作了大量探讨性工作。研究内容包括四个部分:一．两个新型类 (型蝎毒素的cDNA克隆 利用 (蝎毒素氨基酸序列的保守区段设计引物，采用3’RACE技术成功从东亚钳蝎腺中克隆到了2个新型类 (型毒素的cDNA区段，接着分别设计特异引物，做5’RACE，拼接之后得到了全长cDNA，分别命名为BmK (1和BmK (2。它们的前体均由85aa残基组成，其中含有19aa的信号肽和66aa的成熟肽。2个成熟肽彼此间的序列同源性高达82％，与其他(、类(型蝎毒素同源性为55－70％。由于其(2和(3－strand之间的B－loop长度和经典的(及类(毒素相同，且考虑到序列同源性，所以把该两毒素归入类( 毒素类。二．一个新型特异性长链蝎毒素- BmK abT 的cDNA克隆 利用天然分离的BmK abT的N端部分测序结果，设计兼并引物做3’RACE，和5’RACE的结果拼接后得到了BmK abT的全长cDNA。根据cDNA推出的多肽在分子量上和天然毒素质谱的结果存在差异，推测该毒素前体在翻译后修饰过程中，将羧端的Lys剪切，并使之酰胺化。电生理记录表明，10 μM BmK abT可以延长大鼠DRG神经元的动作电位，增大峰钠电流，这一特征与经典(毒素的功能特征对应一致；其分子结构中，(2和(3－strand之间的B－loop长度也和经典的(－蝎毒素相同。但氨基酸序列同源性比较发现，BmK abT与Ts VII，1个源于新大陆的(毒素的序列同源性最高，达到46.2％。此外，BmK abT的N端（功能域）序列与源于新大陆的(毒素Ts IV－5以及CsE V非常相似。由此提示，BmK abT是一个新发现的介于(和(－毒素之间的过渡型毒素。三．一个新型钙激活钾通道阻断剂：Martentoxin的基因克隆及分析 利用天然分离的Martentoxin的N端部分测序结果，设计兼并引物做3’RACE，与5’RACE的结果拼接后得到Martentoxin的全长cDNA。 接着利用5’、3’非编码区设计引物做PCR，得到Martentoxin的全长genomic DNA。分析结果发现，除了在信号肽内部有一内含子以外，在5’非编码区中也有一个从未报道过的内含子。两内含子的5’侧均为gt，3’侧均为ag，和以前在其他蝎毒素中发现的内含子相同。氨基酸序列比较发现Martentoxin和Lqh 15－1以及TmTX的序列同源性大于73％，而和其他钾通道蝎毒素配体序列同源性低于50％。Biosensor及电生理记录发现，其作用于钙激活钾通道，洗脱之后钾通道恢复情况比ChTX要快速及完全。Martentoxin的独特结构（包括基因组DNA和氨基酸序列）和功能特<WP=5>征，可为研究钾通道的多样性提供一个重要的新型探针。四．东亚钳蝎神经钠通道的基因克隆 从蝎神经中抽提总RNA，并逆转录成cDNA。在分析了来源于不同物种（哺乳动物、两栖动物、鱼类、软体动物、昆虫）的钠通道氨基酸序列之后，发现同源区集中在四个结构域的跨膜区上（共25处）。考虑到(毒素作用在第四结构域上有其作用位点，而蝎子钠通道对来源于自身的钠通道神经毒素不敏感，我们选择第四结构域上的同源区设计了11条引物进行3’RACE或者PCR，但由于蝎子钠通道的特异性、PCR选择的退火温度较高、引物兼并性较高等一系列因素，最后未获得阳性片断。但该工作积累了相当数量高质量的蝎神经cDNA以及实验经验，为工作的进一步深入提供了有益的参考资料。